低聚果糖生产菌株的筛选及鉴定.pdf

中国食品添加剂
China Food Additive
分析测试
低聚果糖生产菌株的筛选及鉴定
田震楠,梁学超2,郵学良2,沈丽丽2
(1.中国海洋大学海洋牛命学院,青岛266003
2.山东福∏药业有限公i司,禹城251200
摘要:从玉米芯、玉米芯腐殖质、糖液、淀粉乳罐内壁残渏、草莓园土壤、桃园土壤(1号、2号2个
样品)、苹果园上:壤、杨树林上:壤,共9个样品中筛选到12株转化生产低疑粜糖的菌株,最终分离获得1株具
工业化生产潜力的米曲霉菌株FISI26,转化率达剑60.4%。在对其进行常规形悆学特性鉴定的基础:,
对其ITS因的部分核酸列进行分析,发现FTST-2-6国与霉属的相似度100%,经比对确定是
株米曲,命名为A. Oryzae FIST-2-6。通过10L发酵罐试产研究, HIPLC檢測其发酵液巾低聚果组分含量
高达59.9%,发酵液滤除菌体后呈微色,透光度达86.6%。本研究表明,菌株FIST-2-6是生产低聚果榭的
潜力株,只有很好的应用前景。
关键词:低聚果糖;米曲霉;筛选;菌株鉴定
中图分类号:TS202.1
文献标识码:A
文章编号:1006-2513(2015)05-0194-04
Screening and identification of the strain for the production of
fructooligosaccharides
TIAN Zhen-nan, LIANG Xuc-cha02, QIU Xuc-liang', SHEN Li-ii2
(1. Ocean University of China, College of Marine Life, Qingdao, 266003
2. Shandong Futastc Pharmaccutical Co Ltd, Yuchcng, 251200)
Abstract: Twelve strains of fructooligosaccharides Irom sucrose were screened Irom the samples with high sugar in
the nature. A strain named I1SI-2-6 was sereened and Fermentation conversion rates was 60.4%o, I'IS sequence
analysis and morphological study was used to identify the object strain. The I'IS1 2 6 strain was identified
as Aspergillus, and named as A. Oryzae ITST-2-6 Fructooligosaccharides content was up to 59.9%0 in 101
fermentation liquor by IIPLC detection Thereforc the strain I ISI 2 6 has a broad application prospect and is a
potential strain for fructooligosaccharides production
Key words: fructooligosaccharides; Aspergillus ory zae; screening; strainidentification
低果粬( Fructooligosaccharides,FOS)是叫糖(GF3)、蔗果五糖(GF4)及其混合物的总
低聚糖中非常重要的一类,又称寡果糖、蔗果称。低聚果糖广泛存在于白然界中,如菊忾、
糖族低聚糖或蔗果低疑糖,分子式为GFFn菊芋、大蒜、洋葱、当连果、牛芳属植物、香
(G足葡糖,F是果糖,n=1~3),足指在蔗黛、否葱、麦、小麦、黑麦、蜂蜜、芦笋等,
糖分了的某糖残基上通过B-(1,2)糖苷键连是一种优艮的水溶性食纤维。低聚果椨可以直
接1~3个果糖基而成的蔗果三糖(GF2)、蔗果达大肠中被酸性乳酸菌、双歧杆菌等有益菌
收稿日期:20150416
作者简介:H震楠(1994-),女,ホ要从中生物技术方向的研究。
194
015年第5期
21994-2015chinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreservedhttp://www.cnki.net
分析测斌中国食品添加剂
hina Food additives
选择利用,排坼清肠、调节人体微4牛态平衡。1,2,2菌株筛选分离
时,低聚果糖被公认具有提高人体免疫力,不
称取10g样品浴于90mL无菌水中,并放
被消化吸收,改善脂质代谢,预防蛀牙等优异性于恒温振荡器屮28℃C,80rmin振荡Ih。静晋
能,现被作为功能性料广泛应用,也可以直接20min,移人超浄工作台并用移液枪取上淸液
饮用1?。2007年1月“公众営养收善 OLIGO1mL于盛有9mL无菌水的1号试管中,充分混
项目”在北京启动:2010年国家14部批准匀后再从1号试管取1mL丁盛有9mL双蒸水的
晑纯度粉状低聚粜糖为嘗养强化剂?
2号试管中,依次做7梯度稀释。分別从5号
文献报道,以蔗糖为底物通过发法制备6号、7号试管中取0.1mL稀释液凃平板,正置
FOS的微生物有黑出霉(A4 spergillus niger),30min后,放于28℃恒温培养2~5d。观祭菌落
米出篝( spergillus oryzae)[, Arthrobacter特征,利用微生物接种坏挑取生长盛的菌落
sp.,出芽短使霉(A4 reobasium pullulans),半板划线分离并做斜面培养,为初筛做准备。
酵母( Yeast)等。然而,以微生物发序制备低聚1.2.3摇瓶发培养
果糖的诸多报道显示,其发悖液中FOS的含量在
由待试斜接种于50mL种子培养基,28C,
50%~55%,而高于55%的相关报道很少。通过180rmin培养16~2h,以体积分数10%接种
基因诱变或基因工程技术对转化率一般的菌株进量接种于发酵培养基,28℃,150r/min发酵24h
行收造,进而提高产物的积累量,此法周期较长。对发酵液进行检测,选出低聚粜糖含量最高的复
从白然界中直接分离筛选高转化率的菌种足最经筛菌株进一步试验。
济实用的方法,国内外均不乏成功的例了。本试1.3菌株鉴定
验为了获得转化效率较高的菌株,采用白然选育,1.3,1菌株形悆学观察
分离筛选山FTST26菌株,〕对其进行了菌种
在固体培养基上28℃培养3d,观察其外部
定和实验室规模的发酵实验。
形:采用插片培养法,显徴镜下观察菌丝体形
状、大小,孢子大小、形状、类刑、颜色。
材料及方法
1.3.,2菌株分了生物学鉴定
1.1样品采集
采 IDNA ITS基因序列分析,以提取的
玉米芯、玉米芯腐质、糖液、淀粉乳罐内真菌的总DNA为模板,以ITS基因的通引物
廉残渣、草苻园上壤、桃园上壤1号和2号、苹(IISl:5
-TCCGTAGGTGAACCT-3: ITS2
果园土壤、杨树林土壤,共采集九个样品。
5 TCCTCCGC TTATTGATATGC3)通过
1.2菌株筛选
PCR扩增其序列,反应程序为94℃预变性5min;
培养<