ZB X 66026-87 全氮和粗蛋白测定法.pdf

中华人民共和国专业标准
全氮和粗蛋白测定法
Determination of total nitrogen and
ZBX66026-87
crude protcin
本方法适用于酿造酱油的原料、半成品、副产品的全氮、粗蛋白测定。
仪器
a.分析天平:感量0.1mg;
b.凯氏烧瓶:
C.铁架、铁圈、石棉网
d.煤气灯(或电炉);
e.干燥管、抽气管、橡皮管:
f.氮气球、冷凝管、锥形瓶;
g.粉碎机等。
试剂与溶液
2.1甲基红-溴甲酚绿混合指示剂
甲基红40mg溴甲酚绿1g,溶于60mL95%乙醇中
2.2硫酸铜硫酸钾混合试剂
硫酸铜:硫酸钾=6:100(酸铜和硫酸钾都为分析纯)。
2.3玻璃珠(φ3mm)或锌粒。
2.44%硼酸溶液
称取化学纯硼酸4g,用蒸馏水溶解后定容至100mL
2.5浓硫酸(分析纯
2.640%氢氧化钠溶液
称取化学纯氢氧化钠40g,加蒸馏水溶解,定容至100m
2.70.1N盐酸标准溶液
量取分析纯盐酸9mL,加蒸馏水稀释至1000mL。
2.7.1用无水碳酸钠标定:准确称取无水碳酸钠(预先在180℃的烘箱中烘至恒重)3份,
每份重约0.17g,称准至0.009。分别置于150mL锥形瓶中,各加已煮沸过蒸馏水30mL
温热摇动,使之溶解。再各加甲基红-溴甲酚绿混合指示剂2滴然后用待标定的盐酸
溶液滴定,直至溶液刚呈暗红色为终点,记下耗用亳升数)。
计算:盐酸标准溶液的当量浓度N按下式计算
G
V0.05299
式中:N盐酸标准溶液的当量浓度
G一无水碳酸钠之重量,g;
盐酸溶液之用量
0.05299每毫克当量Na2CO3之重量,g。
2.7.2用已知当量浓度的氢氧化钠标定:准确吸取25mL需要标定的盐酸溶液于150mL锥
形瓶中,加酚酞指示剂2滴,用0.N氢氧化钠标准溶液滴至微红色,在308内不退色为终点。
记下耗用mL数
计算:
N NAOHX V NAOH
盐酸当量=
25
式中: N NAOH一已知浓度的氢氧化钠溶液的当量浓度
V NAOH一氢氧化钠溶液的滴定量,mL;
25一待标定盐酸吸取量,mL
2.73标定程序:若要使盐酸标准溶液的当量浓度尽可能接近0.1000V,可根据初标定浓
度加水或盐酸,多次标定后最终达到。为操作简便,可使用2.7.2法,最后用2.7.1法标定。
操作方法
3.1消化
准确吸取原样2mL(或称取固体样品0.5g,称准至0.0009)。置于干燥的500mL凯氏
烧瓶中,加入硫酸铜一硫酸钾混合试剂5g,浓硫酸8mL,然后放入通风橱内(烧瓶口上放
置小漏斗),加热消化至烧瓶内碳化颗粒完全消失,;消化液呈浅绿色后,再继续加热10min
左右,一般消化时间不超过30min。也可于瓶颈口上插一支干燥管用橡皮管连接玻璃水泵,
借以将腐蚀性气体抽去。
3.2蒸馏
冷却后,缓慢加入蒸馏水120mL,使其全部溶解,冷凝管下端的导管插入盛有4%硼酸溶
液35mL及混合指示剂2滴的250mL锥形瓶中的液面下,然后,沿凯氏烧瓶瓶壁加入40%氢
氧
化钠溶液40mL,玻璃珠4~5粒或锌粒1~2粒,迅速连接蒸馏装置,以防氨气逸出。连接
好后,检查是否漏气,缓缓摇匀接通冷却水,加热、蒸馏,使瓶内液体蒸去三分之二停止
蒸馏。
3.3滴定
将锥形瓶内接收液用0.1N盐酸标准溶液滴定至暗红色为终点。记下耗用mL数。平行
试验允许误差为0.2mL。
同时做试剂空白试验。
4计算
4.1全氮TN含量计算如下:
(V-Vo)×N×0.014
ーX100
式中:V一样品滴定时耗用盐酸标准溶液数,mL;
试剂空白滴定耗用盐酸标准溶液数,mL
盐酸标准溶液当量浓度
0.014一氮的毫克当量;
样品mL数或g数;
TN样品全氮含量,g100mL或g
4.2原料粗蛋白P计算如下:
P=6,25TN………………(4)
式中:P一原料粗蛋白含量,g100mL或g;
6.,25一蛋白质中含氮系数
TN一全氮含量,g/10mL或g
附加说明
本标准由商业部副食品局提出。
本标准由上海市酿造科学研究所起草
本标准主要起草人须风高。
中华人民共和国商业部1987-11-20批准
1988-07-01实施