GB-T 5009.35—1996 食品中着色剂的测定方法.pdf

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B/T5009.35--1996
中华人民共和国国家标准
食品中合成着色剂的测定方法
Method for determination of synthetic colour in foods
GB/T5009.35-1996
1主题内容与适用范围
本标准规定了食品中合成着色剂的测定方法。
本标准适用于食品中合成着色剂的测定。
第一篇高效液相色谱法(第一法
2原理
食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液一液分配法提取,制成水溶液,
注入高效液相色谱仪,经反相色谱分离,根据保留时间定性和与峰面积比较进
行定量。最小检出量,新红5ng、柠檬黄4mg、苋菜红6mng、胭脂红8ng、日
落黄7g、赤藓红18ng、亮蓝26ng、当进样量相当0.025g时最低检出浓度分
0.2 mg/kg; 0.16 mg/kg; 0.24 mg/kg; 0.32 mg/kg; 0.28 mg/kg; 0.72 mg/k;
1.04 mg/kg.
3试剂
3.1正己烷
3.2盐酸。
3.3乙酸。
3.4甲醇:经滤膜(0.5μm)过滤。
3.5聚酰胺粉(尼龙6):过200目筛。
3.6乙酸铵溶液(0.02moML):称取1.54g乙酸铵,加水至1000mL,溶解
经滤膜(0.45um)过滤
3.7氨水:量取氨水2mL,加水至100mL,混匀。
3.8氨水-乙酸铵溶液(0.02molL):量取氨水0.5mL,加乙酸铵溶液(0.02
mol/L)至1000mL,混匀。
3.9甲醇-甲酸(6+4)溶液:量取甲醇60mL,甲酸40mL,混匀。
3.10柠檬酸溶液:称取20g柠檬酸(CaHO1?H2O),加水至100mL,溶解
混匀。
3.11无水乙醇一氨水ー水(7+2+1)溶液:量取无水乙醇70mL、氨水20mlL
水10mL,混匀。
3.12三正辛胺正丁醇溶液(5%):量取三正辛胺5mL,加正丁醇至100mL,
混匀。
3.13饱和硫酸钠溶液。
3.14硫酸钠溶液(2g/L)
3.15pH6的水:水加柠檬酸溶液调H值到6。
3.16合成着以剂标准溶液:准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄、日
落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝各0.100g,置100mL容
中华人民共和国生部1996-06-19批准
1996--09-01实施
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B/T5009.35--1996
量瓶中,加pl6到刻度。配成水溶液(1.00mg/mlL)
3.17合成着色剂标准使用液:临用时上述溶液(或将3.16)加水稀释20倍
经滤膜(0.45pm)过滤。配成每毫升相当50.0ug的合成着色剂。
4仪器
高效液相色谱仪,带紫外检测器,254nm波长。
分析步骤
5.1样品处理
5.1.1桔子汁、果味水、果子露汽水等:称取20.0~40.0g,放入100mL
烧杯中。含二氧化碳样品加热驱除二氧化碳
5.1.2配制酒类:称取20.0~40.0g,放100L烧杯中,加小碎瓷片数片,
加热驱除乙醇。
5.1.3硬糖、蜜饯类、淀粉软糖等:称取5.00~10.00g,粉碎样品,放入
100mL小烧杯中,加水30mL,温热溶解,若样品溶液pH值较高,用柠檬酸溶
液调pH值到6左右。
4巧克力豆及着色糖衣制品:称取5.00~10.00g,放入100mL小烧杯
中,用水反复洗涤色素,到巧克力豆无色素为止,合并色素漂洗液为样品溶液。
5.2色素提取
5.2.1聚酰胺吸附法:样品溶液加柠檬溶液调pH值到6,加热至60℃,将
g聚酰胺粉加少许水调成粥状,倒入样品溶液中,搅拌片刻,以G3垂融漏斗抽
滤,用60℃pH=4的水洗涤3~5次,然后用甲醇一甲酸混合溶液洗涤3~5次(含
赤藓红的样品用5.2.2法处理),再用水洗至中性,用乙醇一氨水ー水混合溶液解
吸3~5次,每次5m,收集解吸液,加乙酸中和,蒸发至近干,加水溶解,定
容至5mL。经滤膜(0.45um)过滤,取10uL进高效液相色谱仪。
5.2.2液一液分配法(适用于含赤薛红的样品):将制备好的样品溶液放入分
液漏斗中,加2L盐酸、三正辛胺正丁醇溶液(5%)10~20mL,振摇提取,
分取有机相,重复提取,至到有机相无色,合并有机相,用饱和硫酸钠溶液洗2
次,每次10mL,分取有机相,放蒸发皿中,水浴加热浓缩至10mL,转移至分
液漏斗中,加60mL正己烷,混匀,加氨水提取2~3次,每次5mL,合并氨水
溶液层(含水溶性酸性色素),用正己烷洗2次,氨水层加乙酸调成中性,水浴
加热蒸发至近干,加水定容至5mL。经滤膜(0.45um)过滤,取10uL进高
效液相色谱仪。
高效液相色谱参考条件
5.3.1柱:YWG-C1810μm不锈钢柱4.6mm(id)x250m。
流动相:甲醇-0.02mol/L乙酸铵溶液(pH=4)。
5.3.3梯度洗脱:甲醇:20%~35%,3%/min;35%~98%,9%/min:98%继续
mln。
5.3.4流速:1mL/min。
5.3.5紫外检测器,254nm波长。
5.4测定
取相同体积样液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪,根据
保留时间定性,外标峰面积法定量。
5.5计算
1000
X
m1×H2/V1×1000×1000
中华人民共和国中生部1996~-06-19批准
1996-09-01实施
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