GBT 6432-1994 饲料中粗蛋白测定方法.pdf

中华人民共和国国家标准
饲料中粗蛋白測定方法
GB/T6432-94
Method for the determination of
crude protein in feedstuffs
代替GB6432-86
本标准參照采用ISO5983一1979《动物饲料-氮含景的测定和粗蛋白含量计算》。
1主题内容与适用范
本标准规定了烔料中粗蛋白含量的测定方法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饷料和单一恫料。
2引用标准
GB601化学试剂滴定分析(容量分析)用标准溶液的制备
3原理
凯氏法测定试样中的含氮量,即在催化剂作用下,用硫酸破坏有机物,使含瓠物转化成碗酸侒。加入
强碱进行蒸馏使氨逸出,用酸吸收后,再用酸滴定,测出氮含量,将结果乘以换算系数6.25,计算出粗
蛋白含量。
4试剂
4.1硫酸(GB625):化学纯,含量为98%,无氯。
4.2混合催化剂;0.4g硫酸铜,5个结晶水(GB665),6g硫酸钾(HG3--920)或硫酸钠(HG3--908),
均为化学纯,磨碎混匀。
4.3氢氧化钠(GB629):化学纯,40%水溶液(M/V)。
4.4硼酸(GB628):化学纯,2%水溶液(M/V)。
4.5混合指示剂:甲基红(HG3-958)0.1%乙醇溶液,溴甲酚绿(HIG3-1220)0.5%乙醇溶液,两溶液
等体积混合,在阴凉处保存期为三个月。
4.6盐酸标准溶液:邻苯二甲酸氢钾法标定,按GB601制备。
4.6.10.1mol/L盐酸(HCl)标准溶液:8.3mL盐酸(GB622),分析纯,注入100omL蒸馏水中。
4.6.20.02mol/L盐酸(HCM)标准溶液:1-67mL盐酸(GB622),分析纯,注入100mL蒸馏水中。
4:7蔗糖(HG3-1001):分析纯。
4.8硫酸铵(GB1396):分析纯,干燥。
4.9硼酸吸收液:1%硼酸水溶液100oaL,加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10mL,0.1%甲基红乙醇溶
液7mL,4%氢氧化钠水溶液0.5mL,混合,置阴凉处保存期为一个月(全自动程序用)。
仪器设备
5.1实验室用样品粉碎机或研缽。
国家技术监督局1994-07-18批准
1995-01-01实施
免费标准下 wwww freeh.nr)
GB/T6432-94
5.2分样筛:孔径0.45mm(40目)。
5.3分析天平:感量0.00018
5.4消煮炉或电炉
5滴定管:酸式,10、25ml。
5.6凯氏烧瓶;:250mL。
5.7凯氏蒸馏装置:常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式。
5.8锥形瓶:150、250mL。
5.9容量瓶:100mL。
5.10消煮管:250mL
5.11定氮仪:以凯氏原理制造的各类型半自动,全自动蛋白质测定仪
6试样的选取和制各
选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g,粉碎后全部通过40目筛,装于密封容器中,防止试
样成分的变化。
7分析步张
7.1仲裁法
7.1.1试样的消煮
称取试样0.5~1g(含氮量5~80mg)准确至0.0002g,放入凯氏烧瓶(5.6)中,加入6.4g混合
催化剂(4.2),与试样混合均匀,再加入12mL硫酸(4.1)和2粒玻璃珠,将凯氏烧瓶(5.6)置于电炉
(5.4)上加热,开始小火,待样品焦化,泡沫消失后,再加强火力(360~410℃)直至呈透明的蓝绿色,然
后再继续加热,至少2h
7.1.2氨的蒸馏(蒸懈步骤的检验见附录A
7.1.2.1常量蒸馏法
将试样消煮液(7.1.1)冷却,加入60~10mL蒸馏水,摇匀,冷却。将蒸馏装置(5.7)的冷凝管
末端浸入装有25mL硼酸(4.4)吸收液和2滴混合指示剂(4.5)的锥形瓶内。然后小心地向凯氏烧瓶
5.6)中加入50mL氢氧化钠溶液(4.3),轻轻摇动凯氏烧瓶(5.6),使溶液混匀后再加热蒸馏,直至
流出液体积为100mL。降下锥形瓶,使冷凝管末端离开液面,继续蒸馏1~2min,并用蒸馏水冲洗冷凝
管末端,洗液均需流入锥形瓶内,然后停止蒸馏。
7.1.2.2半微量蒸馏法
将试样消煮液(7.1.1)冷却,加入20mL蒸馏水,转入100mL容量瓶中,冷却后用水稀释至刻度,
摇匀,做为试样分解液。将半微量蒸馏装置(5.7)的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸(4.4)吸收液和
2滴混合指示剂(4.5)的锥形瓶(5.8)内。蒸汽发生器(5.7)的水中应加入甲基红指示剂数滴,硫酸数
滴,在蒸馏过程中保持此液为橙红色,否则駑补加硫酸。准确移取试样分解液10~20mL注入蒸馏装置
(5.7)的反应室中,用少量蒸馏水冲洗进样入口,塞好入口玻璃塞,再加10mL氢氧化钠溶液(4.3),
小心提起玻璃塞使之流入反应室,将玻璃塞塞好,且在入口处加水密封,防止漏气。蒸馏4min降下锥形
瓶(5.8)使冷凝管末端离开吸收液面,再蒸傜1min,用蒸馏水冲洗冷凝管末端,洗液均流入锥形瓶内,
然后停止蒸馏。
注:7.1.2.1和7.1.2.2蒸馏法测定结果相近,可任选一种
7.1.2.3蒸馏步骤的检验
精确称取0.2g硫酸铵(4.8),代替试样,按7.1.2或7.2.2步骤进行操作,测得硫酸铵含氮量为
21.19土0.2%,否则应检査加破、蒸馏和滴定各步骤是否正确。
7.1.3滴定