GBT 17816-1999 饲料中总抗坏血酸的测定邻苯二胺荧光法.pdf

GB/T17816-1999
前
言
本标准参考了美国公职分析化学家协会AOAC(1995年版)45.1.14~45.1.16《维生素制品和果汁
中的维生素C》、《维生素制品中的维生素C》和《食品中的总维生素C》的规定,在技术内容上,综合上述
三种方法,在操作步骤上作了相应的变更,以便于实际操作。
本标准由全国饷料工业标准化技术委员会提出并归口。
本标准由国家饲料质量监督检验中心(武汉)负责起草
本标准主要起草人:屈利文、钱肪
中华人民共和国国家标准
词料中总抗坏血酸的测定
邻苯二胺荧光法
GB/T17816-1999
Determination of total ascorbic acid in feeds-
o-phenylenediamine fluorometry
范剧
本标准规定了用邻苯二胺荧光法测定饲料中总抗坏血酸的方法
本标准适用于单一饲料、配合饲料、混料及浓缩饲料。不适用以酯化抗坏血酸形式添加的各种饲
料中抗坏血酸的澍定。
在最终提取液中抗坏血酸最小检出限为0.022g/
2引用标准
下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均
为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法
3方法原理
先将试样中抗坏血酸在弱酸性条件下提取出来,提取液中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗
坏血酸,与邻苯二胺(OPDA)反应生成有光的喹喔啉( ( quinoxaline),其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓
度在一定条件下成正比。另外,根据脱氢抗坏血酸与硼酸可形成硼酸-脱氢抗坏血酸络合物而不与郐苯
二胺反应,以此作为“空白”排除试样中荧光杂质的干扰
4试剂
本标准所用试剂,除特殊说明外,均为分析纯。
实验室用水应符合GB/T6682中三级水的规格
4.1偏磷酸-乙酸溶液:称取15g偏磷酸,加入40mL冰乙酸及250mL水,加温,搅拌,使之逐渐溶解,
冷却后加水至500mL。于4C冰箱可保存7~10天。
4.20.15mol/L硫酸溶液:取10mL硫酸,小心加入水中,再加水稀释至1200mL
4.3偏磷酸-乙酸-硫酸溶液:以0.15mol/L硫酸溶液(4.2)为稀释液代替水,其余同4.1配制。
4.450%乙酸鈉溶液:称取500g乙酸钠(CH3 COONA·3H2O),加水至1000m
4.5硼酸-乙酸钠溶液:称取3g硼酸,溶于100mL乙酸钠溶液(4.4)中。临用前配制。
4.6部苯二胺溶液:称取20mg邻苯二胺,于临用前用水稀释至100mL
4.7抗坏血酸标准溶液(lmg/mL-):准确称取50mg抗坏血酸,用溶液(4.1)溶于50mL容量瓶中,并
稀释至刻度。临用前配制。
4.8抗坏血酸标准工作溶波(100g/mL):取10mL抗坏血酸标准溶液(4.7),用溶液(4.1)稀释至
国家质量技术监瞢局1999-08-10批准
2000-02-01实施
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GB/T178161999
100mI。稀释前测试pH值,如其pH大于2.2时,则应用溶液(4.3)稀释
4.90.04%百里酚蓝指示剂溶液:称取0.1g百里酚蓝,加0.02mol/L氢氧化钠溶波,在玻璃研钵中
研磨至溶解,氢氧化钠的用量为10.75mL,磨溶后用水稀释至250mL
变色范围:pH值等于1.2为红色;pH值等于2.8为黄色;pH值大于4.0为蓝色
4.10活性炭的活化:加200g炭粉于1L盐酸(1+9)中,加热回流1~2h,过滤用水洗至无铁离子
(Fe)为止,置于110~-120C烘箱中干燥,备用。
检验铁离子方法:利用普鲁士蓝反应。将2%亚铁氰化钾与1%盐酸等量混合,将上述洗出港液滴
入,如有铁离子则产生蓝色沉淀。
仪器、设备
5.1荧光分光光度计:激发波长350nm,发射波长430nm,lcm石英比色皿
5.2实验室用样品粉碎机。
5.3实验室常用仪器、设备。
6试样制备
取具有代表性样品,用四分法缩分至200g,然后粉碎至过0.45mm(40目)筛,混匀后装于密封容
器,保存备用
7测定步骤
7.1试样中碱性物质量的预检
称取试样1g于烧杯中,加10mL偏磷酸-乙酸溶液(4.1),用百里酚蓝指示剂检查pH值,如呈红
即可用煸磷酸-乙酸溶液作样品提取稀释液。若呈黄色或蓝色,则滴加偏磷酸-乙酸硫酸溶液(4.3)
使其变红,并记录所用量
7.2试样溶液的制备
称取试样若干克(精确至0.0001g,含抗坏血酸约2.5~10mg)于100mL容量瓶中,按7·1预检
碱量,加偏磷酸-乙酸-硫酸溶液(4.3)调至pH为1.2,或者直接用偏磷酸-乙酸溶液(4.1)定容,摇匀。如
样品含大量悬浮物,则需进行过滤,滤液为试样溶液
7.3满定步骤
7.3.1氧化处理:分别取上述试样溶液(7.2)及标准工作溶液(4.8)100mL于200mL带盖二角瓶中
加2g活性炭(4.10),用力振摇1min,干法过滤,弃去最初数毫升,收集其余全部滤液,即为样品氧化液
和标准氧化液。
7.3.2各取10mL.标准氧化液于两个100mL容量瓶中分别标明“标准”及“标准空白”。
7.3.3各取10mL.样品氧化液于两个100mL容量瓶中分别标明“样品”及“样品空白”。
7.3.4」于“标准空白”及“样品空白”溶液中各加5mL明酸-乙酸钠溶液(4.5),混合摇动15min,用水
稀释至100mL。
7.3.5于“标准”及“样品”溶液中各加5mL乙酸钠溶液(4.4),用水稀释至100mL。
7.3.6荧光反应:取7.3.4中“标准空白”、“样品空白”溶液及7.3.5中“样品”溶液2.0mL、分别置于
10mL.带盖试管中。在暗室迅速向各管中加入5mI.邻苯二胺溶液(4.6),振摇混合,在室温下反应
35min,于激发波长350nm,发射波长430nm处测定荧光强度
7.3.7标准曲线的绘制:取上述“标准”溶液(7.3.5)(抗坏血酸含量10g/mL)0.5,1.0,1.5和2.0m
标准系列,各双份分别置于10mL带盖试管中,再用水补充至2.0mL。荧光反应按7.3.6。以标准系列
光强度分别减去标准空白荧光强度为纵坐标,对应抗坏血酸含量(pg)为横坐标,绘制标准曲线。