GBT 25166-2010 裙带菜.pdf

ICS65.150
B 5
中华人民共和国国家标准
GB/T251662010
裙带菜
Wakame
2010-09-26发布
2011-05-01实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布
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CB/T25166-2010
前言
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会归口
本标准起草单位:中国水产科学研究院黄海水产研究所
本标准主要起草人:王飞久、孙修涛、胡自民、汪文俊、王翔字、李修良。
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裙带菜
范围
本标准规定了桾带菜 Undaria pinnatifida( Harvey) Suringar]主要形态构造特征、生活周期与繁
殖、遗传学特征以及检测方法。
本标准适用于桾带菜的种质检测和鉴定。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注口期的引用文件,其随后所有
的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究
是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
NY/T5283-2004无公害食品裙带菜养殖技术规范
3名称与分类
3.1种名
裙带菜[ Undaria pinnatifida(Harv.) Suringar]。
3.2分类
褐藻门( Phaeophyta)、褐子纲( Phaeosporeae)、海带目( Laminariales)、翅藻科( Alariaceae)、裙带菜
属( daria)。
主要形态构造特征
4.1外部形态特征
4.1.1孢子体形态
藻体明显分为固着器、柄和叶片三部分。裙带菜孢子体外部形态见图1。
固着器
4一孢子叶
2一柄
中肋。
3-一叶片;
图1裙带菜孢子体的外部形态
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4.1.2固着器
由多次双分枝的圆柱形假根组成,其末端有吸盘
4.1.3柄
扁平,其腹背隆起而稍圆,树的边缘有狭窄的龙骨。藻体接近成熟时,在柄的炳侧形成耳状孢子叶,
孢子叶定义见NY/T5283-2004中的3.3。
4.1.4叶片
褐色具光泽。幼时长盾形,边缘光滑无缺刻,为单叶。成藻为羽状裂片,叶片的中部是由柄部延伸
而来的中肋,中肋扁平隆起直达叶片的顶端。成藻一般长1.0m~2.5m,宽50cm~100cm。
4.2孢子体内部构造特征
4.2.1表皮
由一层个体小、排列紧密和整齐的细胞组成,呈栅栏状。细胞含粒状色素体。
4.2.2皮层
外皮层细胞呈柱状,大小不等,排列不整齐。内皮层细胞大小相近,排列较整齐
4.2.3髓部
细胞呈丝状或树枝状,排列疏松。
5生活周期与繁殖
5.1生活史
明显的孢子体(2m,大型)与配子体(n,微型)不等世代交替型。
5.2生命周期
裙带菜的生命周期为一年
5.3繁殖
5.3.1性成熟年龄
8个月~12个月
5.3.2无性繁殖
孢子体柄部产生孢子叶,孢子叶上产生孢子囊群,孢子囊内形成游孢子。游孢子单细胞,梨形,长
m~11pm,宽5pm~6m,有两条侧生不等长鞭毛,长的14.0m~16.5pm,伸向前端,短的
5.3am~7.0μm,伸向后端。
5.3.3有性繁殖
卵配方式。雄配子体产生精子囊,每个精子囊产生一个梨形精子,精子(n)长4m~5gm。雌配
子体产生卵囊,每个卵囊产生一个卵(n),卵成熟后排出体外粘着在卵囊口处与精子结合生成合子
(2n)。
6遗传学特征
6.1染色体数
孢子体细胞染色体数2nm=60。
6.2DNA序列特征
6.2.1TTS1序列:总长度242bp。
ccgatcagga aggggacacc ctcctgacac taccgtcgtg cgcgtcggtt ttgtaaaccc cgagaaagaa
71 aatcgttacg cgatgttggg cgaggggcgc ctcgccgagg gttaattccc tcgaatcaaa gcgcacccca
141 cttttcaacc ccattaaact ctgaatctga actcaaaagg geggcatgcg cgcgcccgcg cgcgcggctc
211 ccccaacctt taacgttgta aaactttcag cg
6.2.2ITS2序列:总长度273bp。
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cccetccctc cccctctctt tgtggggggg gggggggttt cggggcggac tatgagtgtt ccggagcgtc
7I cgcgctccga gtgcacccaa tctcgtgaac gaagcctctc gcgccctgcc gcacagagtt gttgacggc
41 ctcgcttcgg cggcgactct cgactcacca aacgtgcgcg gggattcgcc tgcttcattc cggctcatgc
2l1 cttttccccc cccccgcccc cacgcaagtg agggagggag ggaaggagag gccatatcca cac
6.2.3裙帯菜不同品系核糖体ITS全序列(ITS1+ITS-2)变化幅度为0~10个碱基。
7检测方法
7.1形态构造特征检验
采用肉眼和显微镜观察相结合的方法
7.2染色体检验
7.2.1标本的制备
压片法
7.2.2染色液
2%地衣红溶于70%的乙酸中。
3染色方法
固定材料在自来水中漫泡15min~30min后压片。揭开盖片,滴入乙酸地衣红后盖片0.5h,用滤
纸吸出多余的染色液,石蜡封片
7.3裙带菜IS序列的检测
7.3.1裙带菜配子体基因组DNA的提取
取约1g(湿重)的裙带菜配子体,加少量石英沙和PVP-40,在液氮中研成粉末。将粉末转至50mL
的离心管中,加入15mL裂解缓冲液(10mmol/I.Tris-HCl,10mmol/ L EDTA,1.0mol/ L Na CI,
1.0%CTAB,1%SDS,pH=8.0),在65℃保温1h,期间摇匀几次。用等体积的酚:三氯甲烷:异戊
醇(25:24:1,体积比)抽提两次,再将水相转移至一新的50mL离心管中,加入1/10体积RNA酶,
37℃保温1h,再用三氯甲烷:异成醇(24:1,体积比)抽提一次,用2/3体积的异丙醇沉淀回收DNA
DNA最后溶于100μL的TE(10mmol/ L TRIS-HCI,pH=8.0;1mmol/ L EDTA,pH=8.0)中。
7.3.2ITS特异性扩增
总反应体积为20pL,含10mmol/ L Tris-HCLl,pH=8.3,50mmol/LKCl,1.5mmol/ L Mgcl2,
Tag polymerase1U,4种dNTP各2mmol/L,两个引物各4mmol/L~6mmol/L(正向引物P1:5