正相高效液相色谱法测定鱼肝油中的维生素D3.pdf

食品哥究与开发
检测分析
2012年11月
Food Research And evelopment
第33卷第11期
173
正相高效液相色谐法测定
鱼肝油中的维生素D2
黄秋研,王力清'刘熹亮赵丹,明浩
广东产品质量监督检验研究院,广东佛山528300)
摘要:建立一种正相高效液相色语法測定鱼肝油中V,含量的新方法。采用 Agilent2 ORBAX Rx--SL色语柱,以95%
正己究-5%异丙醇为流动相,流速効1.0mI/min,PDA检测波长264nm。結果表明:Vn次度在02gmL-20ymL范
周内,峰面积与含量具有良好的线性关系(r0.9997);平均相对标准偏差为0.52%,平均回收率为94.2%。该方法可
作为鱼肝油中V含量的一种快速检测方法。
关键词:正相高效液相色语;一极管阵列检测器;维生素D2
Determination of Vitamin D, in Cod Liver Oil by NP-AIPLC
HUANG Qiu-yan, WANG Li-ging, IAU Jia-liang, ZHAO Dan-xia, LI Ming-hao
(Guangdong Testing Institute for Product Quality Supervision, Roshan 528300, Guangdong, China
Abstract: A rapid detection method of vitamin D, in cod liver oil by NP-HPLC was established. The sample was
determined under the following conditions: ZORBAX RX-S column, 95% nomal hexane phosphate-5
isopropanol at 1. 0 ml/min, and PDA etection at 264 nm. The results showed that a good linear relationship with
in the cou en ration of0. 2 w l 20 u /ml.(r=0.9 7). The average relative standard deviation was 0.62
and the average recovery of added standard sample was 94.2 %. It can be used for vitamin D in cod liver oil
Key words: normal phase high performance liquid chromatography; photo-diode Array Detetor; vitamin D
鱼肝油常温下呈黄色透明的液体状.稍有鱼腥由于食品卫生国家标准检测方法中对测定保健食品
味。它主要由不饱和度较高的脂肪酸甘油脂组成,此鱼肝油中V还没有相关的检测方法,本方法可作为
外还有少量的谑脂和不皂化物,它在水产、畜禽养殖鱼肝油中V。含量的一种快速检测方法。
和保健品中被广泛使用叫。同时鱼肝油中还含有丰富
大多数文献明中涉及V,提取是经过皂化、萃取
Va(类固醇衍生物),它的主要功能是促进小肠黏膜对
浓缩等处理,步骤都比较复杂,而且容易损失。小文対
钙、磷的吸收促进肾小管对钙费的重吸收。V缺乏样品提取溶剂和提取方法进行忧化实验,简化样品前
时可引起钙磷经肠道吸收减少、骨样组织钙化障碍、处理步骤,此方法具有简便易行、精密度高、回收率高
佝偻病,表现为易惊、多汗、烦躁和骨骼改变。困此测的特点。
定鱼肝油中的V含量,对评价鱼肝油品质优劣、合理
使用鱼油都具有现实意义
1材料与方法
月前,测定Vu方法有荧光法、反相高效液相色谱1.L仪器与设备
法。反相高效液相色增法测定鱼肝油中的Vu含量已
高效液相色谱仪(旧本岛津,ILC-20AT泵,SPD-
有文献报道?,而正相高效液相色谱法却鲜见报道。20AV检测器); L,C Solution色谱工作站(日本岛
津);恒温SHA-CA水浴振荡器、电子分析天平:金坛
作者简介:黄秋研(194-)女(汉)助理工程师,主要从事食品检验市国旺实验仪器厂;WSL-2A比较测色仪:上海现科
技术研究及开发
仪器有限公司;SZC-C脂肪测定仪:上海纤检仪器有
通信作者:王力清,男,食品检验高级工程师质量高级工程师。
限公司。
万方数据
黄歇研,等:正相高效液相色法測定肝油中的维生素D)
检分折
1.2材料与试剂
的影响,要求每次进样的样品浓度低于10gy100mL
丙酮、石油醚、乙酸Z.酷、正己烷(均为分析纯);正
在溶剂的选择上,分别两酮、石油醚、正已烷、乙
已烷、异丙醇(均为色谱纯);VD标准品: Signa;鱼肝油酸乙酯溶解油样,定容,过0.45um的有机膜上机
为抽检样品
测量的结果显示乙酸乙酯误差最人,丙酮、正己烷、石
L.3方法
油瞇无明显差异。同时考虑到溶剂本身对色谐柱的影
13.1色谱条件
响,综合分析得出正己烷作为溶剂最合适,测量结果准
色谱柱: Agilcnt ZORBAX Rx-S.(5n,46mx确,对柱子的损坏最小。
250mm);流动相:正己烷:异丙醇(体积分数比)95:5:2.6标准品及样品的色谱图
流速:1.0mmin;测波长:264nm;柱温:40℃;进样
根据检测波长、流动相、流速、柱温等色谱条件讨
量:00uL
论,参考标准CB5413.9-2010《婴幼儿食品和乳品中维
1.3.2ⅵ溶液的制备
生素A、D、E》的测定中给出V的进样量,得出最佳
准确称取10.00g的V。标准品于小烧杯中,用色谱条件为裣测波长264nm、流动相为正己烷异丙
正己烷溶解并定容于100mL棕色容量瓶中,捋匀,
醇(体积分数比)95:5、柱温40℃、流速为1.0mL
TnII、
到浓度为100gmL的标准储备液。
进样量100pL
1.3.3样品溶液的制备
取抽检的鱼肝油按照.3.3的要求制备样品溶液,
准确称取500样品于100mL的答量瓶中,先用同时132的标准储备液进行稀释,选的上述最佳
适量正已烷使其溶解,再用正已烷定容至刻度,刷烈色谱条件对样品溶液及标准溶液进行色譜分析、以保
振荡2min,静置分层,取上层有机相过0.45m的有紹时间定性和外标法定量,得出的标准品及样品的色
机滤膜备用.以供液相分析
谱图如图1和图2。
2分析与结果
150『264m4m10
2.1检测波长的确定
参照文献6可知,运用紫外扫描仪进行图谱扫
50G
合张斗
描,得出此条件卜的最大吸收液长为264m
.
2.2流动相的确定
对以下几种正己烷:异丙醇(体釈分数比)80:20、
图1标准色请图
85159010、95:5进行单因素试验,综合考虑色谱峰
Fig, Standard chromatogram
保留时间、分离效果得出最佳流动相比例为正己烷;异
丙醇体积分数比(体积分数比)95:5
750
2.3柱温的确定
柱温升高的同时,极性和非极性溶质的容量閃子
新出
5
会随着