大方臭豆腐中高产纳豆激酶菌株的分离鉴定.pdf

2017Vol.36No.7
58
Serial No, 305
China Brewing
Research Report
大方臭豆腐中高产纳豆激酶菌株的分离鉴定
高泽鑫,何腊平'2*,刘业兵,高冰,李翠片,刘涵玉
(1.贵州大学酒与食品工程学院,贵州贵阳550025;2.贵州省农畜产品贮与加工重点实验室,贵州贵阳550025;
3.湖北工业大学生物工程与食品学院,湖北式汉430068;4.贵州大学化学与化工学院,贵州贵阳550025
摘要:该实验对从大方臭豆腐中分离纯化得到的8株产纳豆激酶菌株进行了研究,通过纤维貨白平板法对其产纳豆激酶能力的测
试,筛选出一株酶活力达到5435.39IU/g的高产纳豆激酶菌株 GUYRO2。对该菌株的菌株形态、生理生化特征、16 S RDNA序列分析以
及系统发育树分析,鉴定菌株 GUYRO2为解淀粉芽孢杆菌( Bacillus amyloliquefaciens,
关键词:大方豆腐:纳豆激酶;筛选:鉴定;解淀粉芽孢杆菌
中图分类号:Q939.97
文章编号:0254-5071(201707-0058-05
doi:10.11882/ssn.0254-5071.2017.07.013
Screening and identification of strains with high yield nattokinase form Dafang stinky tofu
GAO Zexin HE Laping=*, LIU Yabing, GAO Bing, LI Cuiqin, LIU Hanyu
(1. Schoo/ of Liquor and Food Engineering, Guizhou University, Guiyang 550025, China 2 Key Laboratory ofagticultura/ and Anima/
Products Store Processing of Guizhou Province, Guzhou University, Guiyang 550025, China; 3. College of Bioengineering and Food
Science, Hubei University of Technology, Wuhan 430068, China; 4. School of Chemistry and Chemical Engineering, Guizhou University,
Guiyang 550025, China,
Abstract Eight nattokinase-producin strains separated from Dafang stinky tofu were investigated in the study. The ability to produce natto kinase of
the strains was determined by fibrinogen plate method, and a high yield nattokinase strain GUYR02 with enzyme activity of 5435.39 I/ wa
screened By morphology, physiological and biochemical characteristics, 16S IDNA sequence and phylogenctic tree analysis, the strain GUYR02 was
identified as Bacillus amyloliquefaciens
Key words: Dafang stinky tofu; nattokinase; screening: identification; Bacillus amyloliquefaciens
纳豆起源于中国的秦汉时期,是传统的发酵食品,唐朝高产纳豆激晦菌株的分离筛选、纳豆激嗨的纯化和鉴定新
时期传入日本,食用历史己有1000年以上。纳豆类似中发现的纤溶酶。本研究从我国传统食品泉豆腐中筛选
国的发酵豆和豆豉,主要经枯草芽孢杆菌( Bacillus subtilis出一株高产纳豆激晦菌株,并采用菌株形态特征、生理生化
发酵而来,日本将纳豆作为调味品和营养食品,国人把豆实验和16 SIDNA?测序对菌株进行鉴定,为纳豆激酶的生产
豉用锅蒸后或炒后作为调味料。日本学者 SUMI H等于奠定基础。
1987年首次对纳豆及其提取物首次作了系统研究,最初将1材料与方法
酶的提取物添加到纤维蛋白平板上,发现有明显的溶栓作1.1材料与试剂
用,并确定其属于具有纤溶活性的激悔
1.1.1实验材
人类的健康常年受到血栓疾病的威胁,全球每年因患
豆腐:贵州省大方县市售;黄豆:市售有机黄豆(非
血栓类疾病死亡的人数多达1200万,其中中国约占总数的转基因)。
1/5,因此溶栓药物的开发成为了研究的热点。由于纳豆.1.1.2试剂
激酶具有高效溶栓作用,因此受到了广泛的关注。纳豆
牛凝血酶、牛纤维蟹白原:沈阳拜英生物技术有限公
激海的米源有很多,如日本纳豆食品?、一些海洋生物?、
尿激海(1240U瓶):中国药品生物制品检定所;溶菌
韩国酱油、台湾的土壤叫中国的豆豉和亚洲发酵虾酱酶:北京索菜宝科技有限公司:细菌基因组DNA提取试剂
等。据报道纳豆激晦可以降低纤维蛋自原、促进催化血盒:天根生化科技有限公司;其他试剂均为国产分析纯
纤维蛋白溶酶原转化为血纤维蛋白溶酶、增加体内血栓溶1.1.3培养基
解因子的合成的作用。目前,许多研究人员的重点在对
初筛培养基(略蛋自平板):5g化L干略素,1gL葡萄糖,
收稿目期:2017-05-0
基金项目:贵州省車大专项(黔科合重大专项201516004-5号);贵州省农业攻关项目(黙科合支撑[201612580号)
作者简介:高泽鑫(1993-),男,硕士研究生,研究方向为食品微生物
*通讯作者:何腊平(1972-),男,教授,博士,研究方向为发酵工程、生物催化与生物转化
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