五氯酚钠在鲫体内的毒性及代谢动力学的研究.pdf

第27卷第3期
大连海洋大学学报
2012年6月
JOURNAL OF DALIAN OCEAN UNIERSITY
June 2 0 1 2
文章编号:2095-1388(2012)03-0243-0
五氯酚钠在鯽体内的毒性及代谢动力学的研究
李磊,黄清发,肖雨,孙建华,戚隽渊,孙振中
(上海市水产研究所上海市水产品质量监督检验站,上海200433)
摘要:在实验室条件下,研究了不同浓度的五氯酚钠溶液(0、1、2、3、4、5、10mgL)对鲫 Carassius
curate的毒性作用,并采用药浴的方式研究了五氯酚钠在鲫体内不同时间段的药代谢动力学。结果表明:
五氯酚钠对卸的毒性作用很强,当药物浓度为10myL时,药浴1h后试验动物100%死亡;当药物浓度为
2mg/L时,试验动物健康存活,药浴%h无死亡现象;将卸在2mg/L的五氯酚钠溶液中浸浴24h后,药
物迅速被鯽吸收,血浆中0.5b五氯酚钠浓度就能达到115ng/mL,1b达到峰值12.0ng/mL,但药物的代
谢校慢,给药70d后才检测不到药物;药物在肌肉中的代谢与血浆中类似,1h达到峰值(1184ngy/mL),
比血浆中的峰浓度略低,药动学参数ta、tyns、MRT
C。m、AUCい一和MAT分别为12.6h、186.8
h、260.4h、1h、1184ng/umL、1106.5ng(mL?h)、22.5he
关键词:鲫;五氯酚钠;急性毒性;药代动力学;气相色谱法
中图分类号:S948
文献标志码:A
五氯酚钠( Sodium pentachlorophenol,PCP)中残留的研究较少,对五氯酚钠在水产动物体内的
广泛应用于农业、工业生产中,如作为除草剂、杀药代动力学规律及残留的研究尚未见报道。为此,
虫剂、杀菌剂以及木材防腐处理等,在中国主要用本研究中,作者以鲫 Carassius auratus为试验对象,
它来进行池塘灭螺。五氯酚钠具有良好的水溶研究了五氯酚钠在鯽体内的毒性及代谢动力学规
性,在自然界中降解缓慢,若长期使用,会造成环律,旨在建立一种完整、准确的揭示五氯酚钠在水
境污染,残留的五氯酚钠还能通过食物链进入人体产动物体内药代动力学特征的方法。
而富集。徽量的五氧酚钠即对人体有毒,可导
致中枢神经系统、血液、肝、肾损伤及内分泌
材料与方法
乱。五氯酚钠性质较稳定,易富集于沉淀物中,在
动植物体内富集率高,可以通过人畜呼吸道、消化
1.1材料
道、皮肤接触等进入机体。在体内五氯酚钠转变为1.1.1鲫试验用鲫购自上海市松江区水产良种
五氯酚,五氯酚具有有机氯和酚的毒性,会对人畜场,体质量为(22t2)g。试验前先在室内常规伺
产生急慢性毒害。美国环境保护署(EPA)已经将喂2周,然后挑选体表完整、健康活泼、无病无伤
五氯酚钠列为可疑致癌物质,并限制其使用。中国的个体用于毒性试验,为了确定药物浓度的大概范
农业部也已禁止在水生动物养殖中使用五氯酚钠。围,正式试验前先进行预试验。养殖场地为上海市
但目前仍有一些养殖户在水产养殖中非法使用五氯水产研究所内的玻璃养殖池,养殖规模根据试验要
酚钠,在2010年农业部第一、二次产地水产品质求预先进行设计。试验用水为曝气7d以上的自来
量抽检中仍能检测出五氯酚钠。因此,研究五氯酚水,相关水质指标符合渔业水质标准。
钠在淡水鱼体内药代动力学规律及残留的检测方1.1.2试验药品及仅器试验药品有五氯苯酚标
法,将有助于进一步规范进而杜绝该药物在水产品准品,质量分数为99.0%,购自 Sigma公司;五氯
养殖中的非法使用。
酚钠原料药,质量分数为80%,购自上海富庶化
目前,国内外对五氯苯酚及其钠盐在土壤习、工有限公司;正己烷为HPLC级;其他试剂均为市
水体、木材?、皮革?、纺织品。、蜂蜜り、售分析纯
尿?中残留的研究相对较多,而对其在动物组织
试验仪器有PL202-S电子天平( METTLER)、
收稿日期:2011-07-28
作者简介:李磊(1982-),男,博士,工程师。E-mail:lun2008@yahoo.com.cu
万方数据
大连海洋大学学报
第27卷
MSI Minighakel型震荡器(KA)、 Eppendorf 5810R一次,合并有机层。在正己烷提取液中加入4mL
离心机、 Agilent GC6890气相色谐仪(配微电0.1mo/mL的KCOの溶液,涡旋2min,离心;吸
子捕获检测器μECD)。
取K2CO溶液层于另一离心管中,再用4mL0.1
mo/mL的K2CO3溶液提取一次,合并2CO3提取
1.2方法
液。将0.2mL乙酸酐加入到上述K2CO3提取液中,
L.2.1毒性試验挑选健康活浚、大小均匀的鲫祸旋2min并不断放气,加2.5mL正己烷提取两
70尾,分为7组,每组10尾,采用6个浓度梯度次,合并正己烷层,定容至5.0m,用2.0B无水
和1个对照进行预试验”。试验采用常温静水模NっS0,脱水,待测。
式,时间为95b,根据试验结果确定该种药物对试1.2.4标准曲线和回收率准确称取20.20g互
验鱼的最高安全浓度。如果该浓度范围无法确氯苯酚标准品,用0.1 mol/L K CO溶液溶解,定
定,则另选一个浓度范闹进行试验,以确定试验所容至100mL,浓度为200g/mL,于4℃下保存。
儒的最高安全浓度。将试验药物配成母液,再按比将上述溶液稀释配制成0.03、1、2、5、10、50
例稀释成浓度为0(对照)、1、2、3、4、5、10y/m的标准溶液,各吸取1mL,处理步骤同样
mg/L,将试验鱼从低浓度到高浓度逐个放入。试品处理方法,进行气相色谱测定,绘制“色谱峰面
验期间不喂佴,将死亡的鱼及时捞出,并放入清水
积/五氯酚钠浓度”标准曲线。
中,5min不动为死亡。试验开始后,连续观察各
取空白对照组鲫血浆100L,准确加入一定
浓度下試验鱼的异常行为、体表变化等,记录死亡量的五氯酚钠溶液,配制成五氯酚钠浓度分别为
和存活数量。
2、20、100ng/mL的血浆样品,按前述血样处理
1.2.2药代动力学试验挑选健康活泼、大小均方法处理,用气相色谱测定。取空白对照组鲫肌肉
匀的鲫100尾用于试验。将试验鱼在药物浓度为2
1.0g,准确加入一定量的五氯酚钠溶液,配制成
五氯酚钠浓度分别为2、20、100ng/mL的肌肉样
mg/L的水溶液中浸浴24h后,转入清水玻璃池中
品,按前述肌肉样品处理方法,用气相色谱测定。
饲养,水温为(250.5)℃,pH为7.0-8.0。分回收率为每个测得浓度占实际浓度的百分比。
别于药浴后的0、2、4、8、12h和1、2、い、1.2.5色谵条件色谱柱为DB-35MS(30mx
7、8、10、12、14、21、28、35、42、49、63、70
0.25mmxO.25um);进样口温度为250℃,检测
d随机取样3~5尾,从心脏取血,置于肝素化的器温度为300℃;柱温为140℃(保留2min),
离心管中,将血样与肌肉等组织均置于冰箱(-40
以10℃/min的升温速度升至200℃(保留7
℃)中保存,待测
min),再升至260℃(保留3min);载气为
1.2.3样品处理
99.999%的高纯氮气,流量为1.2mL/min,线速
)血浆样品的处理。准确吸取100