NYT 2656-2014 饲料中罗丹明B和罗丹明6G的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS65.120
B46
中华人民共和国农业行业标准
NY/T2656-2014
饲料中罗丹明B和罗丹明6G的测定
高效液相色谱法
Determination of rhodamine B and rhodamine 6G in feeds--
High performance liquid chromatography
2014-10-17发布
2015-01-01实施
中华人民共和国农业部发布
NY/T2656-~-2014
本标准按照GB/T1.1-200给出的规则起草。
本标准由农业部畜牧业司提出。
本标准由全国饲料τ业标准化技术委员会(SAC/TC76)归口。
本标准起草单位:中国农业科学院农业质量标准与检湖技术研究所
本标准主要起草人:张妍、杨曙明、邱静、于洪使、赵小阳。
NY/T266-2014
饲料中罗丹明B和罗丹明6G的测定高效液相色谱法
1范園
本标准规定了饲料中罗丹明B和罗丹明6G的高效液相色谱测定法。
本标准迂用于配合铜料浓缩饲料、添加剂预混合饲料中罗丹明B和罗丹明6G的测定
本标准的定量限为1pg/kg
2规范性引甪文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件
GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T14699.1饲料采样
GB/T20195动物饲料试样的制备
3方法原理
饲料中的罗丹明B和罗丹明6G经过2%三氯乙酸乙腈溶液提取,正己烷脱脂,离心后上清液用氮
气吹干,甲醇定容,高效液相色谱测定,外标法定量
4试剂和材料
除特殊注明外,所用试剂均为分析纯;水应符合GB/T6682中一级用水规定;溶液按照GB/T603
的规定配制。
4.1甲醇:色谱纯
4.2正己烷:色谱纯。
4.32%三氯乙酸乙腈溶液:取10g三氯乙酸溶于500mL乙腈中
4.41%磷酸:取10mL磷酸,用水溶解并稀释至100omL
4.5罗丹明B和罗丹明6G标准品:纯度≥98%
4.6罗丹明B和罗丹明6G财备液(mg/mL):分别准确称取罗丹明B和罗丹明6G标准品10mg,用
甲醇溶解,定容至10mI。贮备液在一20℃保存,有效期一年
4.7罗丹明B和罗丹明6G标准中间液(1gg/mL):分别准确吸取1mL的罗丹明B和罗丹明6G标准
贮备液,用甲醇稀释定容全100mL,2℃~8℃保存,有效期10d
4.8罗丹明邱和罗丹明6G;标准工作液:吸取适量的罗丹明B和罗丹明6G标准中间液,用甲醇分别配
置成0.5ng/mL、lng/mL、10ng/mL、50ng/mL和100ng/mL.的泥合标准工作液,2℃~8℃保存,有
效期10
4.9滤膜:2m
5仪器和设备
5.1高效液相色谱仪:配有荧光检测器。
5.2离心机:转速大于10000r/min
NY/T2656~2014
5.3漩涡振荡器
5.4振荡器
5分析天平:感量0.00001g
5.6天平:感量0.01g
6试样制备
按GB/T1469.1抽取有代表性的样品,四分法缩减取样。按GB/T20195的规定制备试样,粉
碎,全部通过孔径为0.42mm的试验筛,混匀,装入密闭容器中,避光保存,备用
7分析步骤
7.1试样提取
称取1g试样(精确至0.01g),置于25mL离心管中;加入2%三氯乙酸乙腈溶液(4.3)5ml-,40℃
超声提取30min;加入5mL.正己烷,漩涡振荡1min,在1000r/min下离心5min。将下层乙腈转移至
10mL离心管中,50℃下氮气吹千,用1.0mL.甲醇溶解,滤膜过滤后测定。
7.2色谱条件
色谱柱:C1s,柱长150mm,内径4.6mm,粒度5n,或性能相当者。
柱温:30℃
进样量:1
流动相:1%磷酸十乙腈=50+50
流速
miming
荧光检测器条件:激发波长540nm;发射波长570nm。
7.3定量测定
分别取适量的罗丹明B和罗丹明6G标准工作液(4.8)及试样溶液(7.1)测定,以色谱峰保蹈时间
定性,以色谱峰面积响应值作单点或多点校准定量。罗丹明B和罗丹明6G标准色谱图参见附录A
8结果计算
试样中罗丹明B或罗丹明6G的含量,以质量分数X计,数值以微克每千克(ug/kg)表示,按式(1
计算:
X
CA XAXV
式中
m-试样质量,单位为克(g);
V一试样溶液的定容体积,单位为毫升(mL);
C一标准工作液中相应罗丹明B或罗丹明6G的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);
A1试样溶液中岁丹明B或罗丹明6G的峰积;
标准工作液中相应罗刀明B或罗丹明6G的峰面积。
测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留3位有效数字。
9重复性
在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不大于其算术平均值的15%