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食品中罗丹明B的测定
BJS201905
1范围
本方法规定了食品中罗丹明B的液相色谱测定方法及液相色谱-质谱/质谱确证方法。
本方法适用于半固态调味料、花椒及花椒粉、花椒油、牛肉干、蜜饯、水果干制品中罗
丹明B的测定和确证
2原理
试样中岁丹明B用含酸的甲醇水浴液提取后,经混合型阳离子固相萃取小柱净化,采
用液相色谱荧光检测器检测,外标法定量。试样巾检出罗丹明B后采用液相色谱质谱/质谱
法进行确证
3试剂和材料
除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯,水为GBT6682规定的一级水。
3.1甲醇(CH2OH):色谱纯。
3.2乙腈(C2H3N):色谱纯。
3.3甲酸(CH2O2):色谱纯。
3.4氨水(NH2?H2O):色谱纯。
3.5含0.1%中酸的水浴液:取中酸(3.3)1mL用水稀释至1000mL,用滤膜(0.22um,
水相)过滤后各用。
3.650%甲醇水溶液:准确量取500mL甲醇(3.1)于1L容量瓶中,用水定容至刻度。
3.7含0.1%甲酸的甲醇水溶液:取1mL甲酸(3.3),用甲醇水溶液(3.6)稀释个1000mLe
3.8含0.1%甲酸的乙浴液:取1mL甲酸(3.3),用乙情(3.2)稀释至1000mL,滤膜
(0.22m,有机相)过滤后备用。
3.9含0.1%甲酸的乙腈水溶液:取0.1mL甲酸(3.3)和35mL乙腈(3.2),用水稀释至
100mL,混匀。
3.10含5%氨水的甲溶液:取5mL氨水(3.4),用甲醇稀释个100mL,混匀。(临用
现
3.11岁丹明B标准品
罗丹明B标准品的分子式、相对分子量、英文名称、CAS登录号见表1,纯度≥99%
表1罗丹明B标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量
中文名称
英文名称
CAS登录号
分子式
相对分子量
罗丹明B
Rhodamine B
81-88-9
C28I131CIN203
479.01
3.12罗丹明B标准储备液:准确称取岁丹明B标准品10mg(精确至0.000g),置于
100mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容不刻度,摇匀,制成浓度为100ugmL的标准储备液。
溶液转移?试剂瓶中,置于-18℃避光保存,有效期为6个月。
3.13中间标准溶液:准确移取0.5mL罗丹明B标准储备液(3.12)于100mL容量瓶中,
用甲醇定容至刻度,混匀,此溶液的浓度为500ng/mL。置于4℃避光保存,有效期为1个
月
3.14标准工作溶液:用含0.1%甲酸的乙腈水溶液(3.9)将中间标准浴液(3.13)稀释成
0.0ng/mL、0.5ngmL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ngmL、10.0 ng/ml、20.0ngmL、50.0ngmL
的标准工.作溶液。临用现配
3.15混合型阳离子固相萃取柱(60mg/3mL):基质为苯備酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高
聚物,或相当者。使用前依次用3mL甲嵉,3mL水活化
3.16陶瓷均质子。
仪器和设备
4.1液相色谱仪:配芡光检测器
4.2液相色谱-质谱/质谱仪:配有电喷雾离子源(ES源)。
4.3旋涡混合器。
4.4离心机:转速≥8000r/min
4.5电子天平:感量分别为0.000198和0.01g。
4.6具塞离心管:50mL
4.7组纵捣碎机。
4.8固相萃取装置。
5试样制备与保存
5.1半固态调味料
取适量样品,捣碎,混匀,常温保存各用
5.2花椒及花椒粉
取适量样品,粉碎后过40日筛,常温保存备用
5.3花椒油
充分混匀,常温保存备用。
5.4牛肉干
取适量样品,搁碎,混合均匀,冷藏保存备用。
5.5蜜饯、水果干制品
取适量样品,捣倅,混合均匀,冷藏保存备用。
6测定步骤
6.1试样前处理
6.1.1提取:准确称取2g(香辛料样品称取1g,精确至0.01g)试样置于50mL塑料离
心管中,准确加入10.0mL含0.1%甲酸的甲醇水溶液(3.7),混匀,加入陶瓷均质子两颗
(调味油试样除外),于旋涡混匀器上涡旋15min,于8000r/min离心10min,取3mL提
取液层浴液过0.45um有机相滤膜后待净化
6.1.2净化:准确移取1.0mL提取液(6.1.1)至固相萃取柱(3.15)中,依次用3mL0.1%
甲酸水浴液(3.5)、3mL水、3mL甲醇淋洗固相萃取柱。用6mL氨水甲醇浴液(3.10)
洗脱日标物,并收集洗脱液,洗脱溶液在45℃下,用氮气吹至近干,残渣用1.0mL0.1%含
酸的乙腈水溶液(3.9)溶解(香辛料样液残渣用0.5mL溶解),过0,22m有机相滤膜上
机测定
6.2仪器参考条件
a)色谱柱:C18柱
4 6 mmx 100mm,
粒径3.5um,或性能相当者。
b)流动相:A为0.1%甲酸水溶液(3.5),B为乙腈(3.2),梯度洗脱程序见表2。
c)流速:1.0mL/min
柱温:35℃
c)进样量:10uL。
)激发波长:550nm:发射波长:580mm。
表2梯度洗脱程序
时?(min)
流动相A(%
动相B(%)
Initial
0.
6.0
66
35
70
6.5
70
8.0
65
35
10.0
65
6.3空白试验
除不加试样外,均按试样同法操作
结果计算
试样中罗丹明B的含量按式(1)计算获得: