HPLC法测定玉米中的玉米赤霉烯酮含量.pdf

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HPLC法测定玉米中的
玉米赤霉烯酮含量
□刘畅鞍山市食品药品检验所
摘要:玉米赤霉烯又称F-2毒素、ZEA,主要会污染玉米、小麦、大麦、小米、大米和燕麦等谷物。本文主要通过对国
标检测方法的优化,对浓缩重溶等方式建立分析方法,保证了上机检测浓度,提高了检测效率,使回收率和精密度
均满足国标GB/T27404-2008的要求。
关键词:玉米赤霉烯酮玉米高效液相色谱法
玉米赤霉烯酮又称F-2毒素、ZEA,主要会污染玉米、
3.2标准工作液:用流动相稀释,配制成10ng/mlL、
小麦、大麦、小米、大米和燕麦等谷物。ZEA具有和雌激素50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL的系列标准
类似的结构,可与雌激素受体结合,发挥雌激素效应,其作工作液,4℃避光保存。
用强度为雌激素的十分之一。ZEA可引起卵巢病变,干扰动
物排卵、延长发情间期、减少胎仔数或引起不孕等。
4实验方法
我国规定谷物及其制品中的玉米赤霉烯酮限量指标为小4.1提取
于等于60ugks
般采用液相色谱、气相色谱和试剂盒
本次实验采用市售玉米碴,经过高速粉碎机粉碎后,准
等方法进行检测。
确称取5g(0.0019)放于50mL离心管中,加入20mL提取液,
本文通过对国家标准GB5009.209-2016/第一法进行涡旋振荡2min后,置于离心机中,8000pm离心10min
优化,分别对方法检出限浓度、定量限浓度、限量指标浓度上淸液通过玻璃纤维滤纸过滤,弃去初滤液3mL,收集余下
等进行加标实验,结果表明,用HPLC法进行ZEA质量浓度滤液。准确吸取3mL滤液于50mL离心管中,加入25mL
的测定,回收率和精密度均满足GB「27404-2008的要求。PBS缓冲液,混匀。
1试剂和材料
4.2净化
超纯水、乙腈(色谱级)、甲醇(色谱级)、ZEA标
将免疫亲和柱恢复至室温后与固相萃取装置连接,再
准物质( Pribo Lab)、提取液(乙腈:水=84:16,W)則、将上样器连接于小柱上端,加入样品与PBS混合液,使
PBS缓冲液( Hyclone)、吐温-20、ZEA免疫亲和柱( Romer)。混合液缓慢通过小柱,弃去流出液。待混合液完全流出小
柱时,先向上样器中加入10mL0.1%吐温-20进行淋洗,
2仪器
再加入10mL水继续淋洗,弃去全部流出液。最后将小柱
安捷伦1100高效液相色谱仪、荧光检测器、离心机、下方连接5mL收集管,用0.5mL甲醇洗脱3次,收集洗
氮吹仪。
脱液。
3标准溶液
4.3浓缩
3.1标准储备液:准确称取适量的标准品(精确至
将收集到的1.5mL左右的洗脱液于低于45℃氮气缓缓
0.0001g),用乙腈溶解,配制成浓度为100ug/mL的标准储吹干,再用流动相重新溶解并定容至1mL,过0.22 u MPTF
备液,-18℃以下避光保存。
滤膜,待上机。
741食品安全导刊2017年8月
万方数据
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4.4空白试验
Signal 1: FLDI A, Ex-274, Em=440
不称取样品,按4.1~4.3的步骤做空白试验。
Rettime Ivl Amount
Area At/Area Ref Grp Name
Imini sig
[ng/ml]
6,1911110.006012.505
l=--1ーー1ーーーー
250,000
3100,000003.576
27,96219
4.5色谱条件
4200.000007.2893027.43748
5500,0000018.3720527,21525
色谱柱:迪马科技C18色谱柱,4.6mm×150mm,
图5.1
5pm;流动相:乙腈+水+甲醇=46+46+8,体积比;流速
1mL/min;检测波长:激发波长274nm,发射波长40nm
Calibration Curves
进样量:40uL;柱温:35℃。
Aren
zea at exp, RT: 6.191
FLD1A,Ex=274,こm=440
Correlation:
0,99998
Residual Std. Dev,: 0, 05311
Formula: y- mx+ b
5结果与讨论
m:xy
3.69208e-2
x: Amount [ng/ml)
5.1标准曲线
图5.1和5.2可以看出,在ZEA的浓度为10ng/mL
500ng/mL范围内,y=0.037Xx-0.059,「=0.99989因此,
Amourtingfmll
可以用外标法进行ZEA质量浓度的测定。ZEA的质量浓度
图5.2
(峰面积+0.059)0.037。
参考文献
[1]高爽,梁珍,邓俊良,杨颜铱,陈芸.玉米赤霉烯
5.2回收率与精密度
酮和脱氧血腐镰刀烯醇对雌性动物的生殖毒性及作用机制
本次实验中,空白试验与样品中均未检出ZEA。加标试动物营养学报,2016,28(4):1042-1049.
验结果见表5.1
[2]食品安全国家标准食品中真菌毒素限量,GB2761
5.3讨论
[3]食品安全国家标准食品中玉米赤霉烯翻的测定,GB
本次实验较之国标方法,减少了取样量以及上机检测的5009.209-2016.
进样量,通过浓缩重溶等方式保证了上机检测浓度,提高了
[4]实验室质量控制飙范食品理化检测,GBT27404-
检测效率。加标试验结果可达到国标GB5009.209-201613/2008附表F.1和F.2
第一法的检出限,并满足GBT27404-2008对方法确认的
[5]朱孟丽,彭聪,洪振涛.高效液相色谱法对饲料中
要求,证明本方法在实验室中检测玉米中的ZEA含量是可玉米赤器開的测定,領料工业,2007年第28巻第1期
行的
表5.1加标试验结果
添加水平,ugkg
17
60
平行测定次数测定值
回收率%
测定值
回收率%
定值
回收率%
10.48
62
39.49
99
56.05
93
10.36
6
40.17
56.72
10.39
39.16
54.70
10.51
39.8
54.02
信噪比>3
10.61
39.83
54.02
6
10.26
60
40.17
100
55.03
92
平均值
10.44
6
39.78
55.09
RSD.
1.2
1.0
2.0
August 2017 CHINA FOOD SAFETY 75
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