碘乙酰胺改性溶菌酶抑菌效果研究.pdf

研究论文
碘乙跣胺改性溶藺酶抑菌效果研究
金茜,智秀娟,姜怀玺,仝其根
(北京衣学院农产開有評微生物及农线安全检测与摔制北京市重点实验室食品质量与安全北京实验室,北京
摘要;在逆因素实验的基础上,应用正交分析,优化碘乙胺改性溶茵酶的条件,并测定此改性
条件下溶菌酶对革兰氏阴性箇的抑菌活性。结果表明,0.06mdl/.映乙酰胺与5mg/m溶菌酶改
性时对大肠杜菌和沙门氏菌的抑菌效采最好,在45℃,反应时间30min,pH=5的条件下改性后
的溶芮酶,其对大肠杆首的护押菌困直径为25.7mm,是政性前抑菌圏的2.7倍。在55℃,反应时
间70min,pH=6的杀件下改性后的落茵酶对大肠奷的抑菌圈直径为24.mm,是改性前抑箇
的2.6倍。这充分说明蛋淸溶茵酶经过秧乙酰改性后,可以用于对羊兰氏阴性菌(大肠杆菌
K12、沙门氏菌)抑茵,而且效果良好。
关键词:蛋清滺菌酶;碘乙豌牍;大肠杆菌:沙门氏菌;抑
中图分类号:TS201.3文献标志码:A文章编号:1673-1689(2014)07-0750-05
Study on the Antimicrobial Effect of iodoacetamide Modified L ysoz me
I/ ian, ZH/ Xnujumn, LA( Hcii, G igen
Beijing Key Laboratory of Agrcultural Product Detection and Control of poilage Organisms and Pesticide
Residue /Beijing Laboralory f oud ali and Salely, eiiy Lmiersil of Agricullure, Reijing 102206, in
Abstract In order to improve Le antibacterial effect of lysozyme on Escherichia coli and other
gram negalive bacleria, aceording Lo the single -acior exueriments and orthogonal meliotlology was
employed lo optimize the Iodoacetamide modified lysozyme. The results show thal 0.06 mol/L iodine
acetamide and 5 mg/ML lysoz me bacteriostatic effect is best. The biggest inhibition zone diameter
Ia Lie Escherichia coli is 25.7 mm when the reacion lemperalure is C, reaction lime is 30 min
and PH is 5. The antibacterial circlc diameter is 2.7 times of the original. The biggest inhibition
zone diameter to the salmonella is 24.1 mm when the reaction temperature is 55(, reaction time is
7( min, and PH is 6. The antibacteria cirele diameter is 2.6 times of the original. This was
considcrcd Ihal cgg white lysozyme alcr iodoacetamide modified, can be: uscd or Gram-negative
acteria (E.colt 12, samonella) inhibition, and the cffcct is good
Keywords: hen egg while lysozyme, iodoacetamide, Escherichia coli Salmonella, baclerioslali
收稿日期;2013-12-25
基金项;比京市科技威果转化和产业化项日
通信作者:?其根(1962-),男,山东寿张人,救授,主要从亭农产品加工研究。E- mail: t
750) Journal of Pwid Stience and Bintethnlngy Y.3 G7 2014
万方数据
研究论文
乙胺政性溶宵邦抑茵效呆研究
溶菌酶可以水解黏多糖,是一种碱性酶。它作高(10±0.1)mm;DHP-500电热恒温培养箱:天津中
为一种小分子蛋白质,其有对组织无刺激无声性等环电炉有限公両产品;DSI1L-300型水浴恒温振荡
优点,在《关于批准溶旃等物质为食品添加剂及器:江苏大仓試验设备产品;HWS12电热恒温
部分食品添加剂和营养强化剂扩大使用范同、用量水浴锅:上海一恒科技有限公司品:HD-920超净
的公告(2010年第23号)》中,浴菌珘经可以在作台:北京东联哈尔仪器制造有限公同产品
干略和发酵中作为防腐剂使用叫菌酶主要通过1.3方法
砹坏细胞壁的Nー乙珧胞壁酸和Nー乙酰氨星葡糖1.3.1溶茵酶改性前后抑前效果測定采用倍比
河的β-1,4粬苷键,使細胞不溶性黏多粘分解成稀释法測定改性前溶菌珻对兰氏阴性的抑菌
可溶性糖,导致细胞壁破裂、内容物逸出而溶解细效果。取经过高压灭菌的试管9义于超净台,依次
菌。由丁革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌的细胞壁编上号码,在各管中分别加入2m.营养?汤液体
舦聚糖含量不同,而使得溶茵酶对兰氏性菌培养。然后向1サ管加入质量浓度为10mg/mL
的破坏远远不如革兰氏阳性菌效果好
的溶藍酶样品液2mL,漩涡能荡仪充分泥匀后
前,为了提高溶梅对大肠杆菌等阴性细菌吸出2ml.加入2号试管中混匀,依照此法倍比稀
的抑菌效果、国内外し经做了一些相关研究,可以释至第7管,第7管混匀后吸出2mL混合液弃去。
通过热处理、利用还原剂还原溶薗晦的二硫健、添再分別向1-8管加人已活化的需要测试的液100
加其他化学物质j溶酶协同作用等攻变酶的格
L。第⑧管中不加醇液加菌液,作为阳性对照,第9
象州。最常见的是利用小分子对溶菌珻进行修饰,溶管中加人2mL浓虔为10mg'mL的溶珻样品液,
菌酶分了表面有8个半氨酸残基(IHS-CH2-),可混匀后弃去2mL,不加菌液作为生长对照。将9支
以与外来的化合物发生化学反应,加含氨基小分了试管置于37℃恒温振濒培养緇中培养12h后取
修饰是不错的选怿。礁Z獣昇一种化学活性很强出,用理絀水将各试管进行稊度稀释,诜取10
的试剤,易与巯基进行反将溶酶进行修饰,并 cfi/mi.的液用倾倒法进行γ板菌洛计数,观祭结粜。
可以保证溶菌酶分∫的还原状态,常用于有机合成
采用牛津杯法,通过测量菌落数与抑菌圏直
和化学修饰中,也用于蛋白組学山中半胱氨酸和组氨径大小分別研究溶菌酶改性前后对大场杆及沙
酸的烷棊化试剂。
门氏菌的扣菌效果。在无藤条件下,将已灭菌的营
碘乙胺与筑基的反应过程为:R-SH-养琼脂培养加热例元全融化,以每15m,(下
ICHCO\H2→R-S- CH CONH2+HS,因此,通过选取层)倒入培养皿中,待其凝固。之后,将融化的培养
碘乙胺在内的3种小分子化合物与溶菌海分子基冷却到50℃左右混入近任浓度的菌液200pL
进行有机合成,以革兰氏阴性的