会东块菌多糖的纯化及其分子量测定.pdf

食品与发酵科技
Food and Fermentation Techno.
第46卷(第6期)Vol.46,No.6
会东块菌多糖的纯化及其分子量测定
张世奇12
(1.西南大学食品科学学院,重庆400715;2.重庆市农产品加工及贮藏重点实验室,重庆400715)
摘要:本研究采用DEAE-52纤维索椎及 Sephadex-100柱从会东块茵水提物中分离纯化得到两种块茵多糖PST
W、PST-A。经高效液相色话法(HPLC)鉴定,这两种多糖均为单一组分,且PST-W分子量为128059.9Da;PST-A分子
量为729140.5Da。
关键词:块多糖;纯化;分子量;HPIC
中图分类号:TS207.4
文献标识码:A
文章编号:1674-506X(2010)06-0097-0004
Purification and Molecular Weight Determination of AI
DONG Truffles Polysaccharide
ZHANG Shi-q
(. College of Food Science, Southuoest University, Chongqing 400715
2. Chongqing key Laboratory of Produce Processing and Storage, Chongqing 400715)
Abstract: Two water-soluble polysaccharides (PST-W and PST-A )were isolated and purified by DEAE-52 cellulose and
Sephadex G-200 column chromatography from water extracts of HUI DONG truffle in the present study. These
polysaccharides were identified by high performance liquid chromatograph (HPLC)and found to be highly homogeneous
with a relative molecular mass of 128059.9 Da(Pst-w)and 729140SDA PST-A
Keywords: truffles polysaccharide; purification; molecular weight; HPLC
doi:10.3969issn.1674-506X.2010.06-026
块菌( Perigord Truffle)又称块菇、松露、无娘藤、化目前主要采用纤维素阴离子交换柱层析法及凝胶
猪拱菌叫等,属于子囊菌亚门、块菌目、块菌科、块菌柱层析法等,根据文献和考虑到块菌多糖的性质。本
属,是地下菌( Hypogeous fung)中的一个比较重要研究以会东块菌水提醇沉所得多糖样液为原料,采
的子囊菌类群。子实体在土壤中生长,除个别种类在用DEAE-52纤维素柱层析及 Sephadex-100柱层
成熟时半露出土表外,大部分种类自始至终埋生于析法对其进行分离P?,采用HPIC法鉴定其纯度及
地下,是与树木共生的外生菌根型药食两用真菌。块测定其分子量,以期为块菌多糖的进一步开发研究
菌的主要活性成分有α一雄烷醇、神经酰胺、块菌多提供理论依据。
糖( polysaccharide of Tuber sinense,PS)等。研究表1材料与方法
明,块菌多糖作为一种新的真菌多糖,水溶性好、毒1.1试验材料、试剂、仪器设备
性低、抑制肿瘤作用明显,可望开发成抗肿瘤免疫疗1.1.1试验材料
法的药物。现有的提取多糖的方法主要为碱提取
水提醇沉块菌多糖溶液:块菌产自四川省会东
法,酸提取法和中性水提取法?,去蛋白有 Seveage县,真空包装,冻藏备用。
法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法等。多糖的分离纯1.1.2药品试剂
收稿目期:2010-11-18
作者简介:张世奇(1983-),男,硬土研究生,研究方向为食品质量与安全控制。
食品与发酵科技
2010率6
DEAE-52纤维素上海锐谷生物科技有限公100柱层析法进行分离2?
司; Sephadex-100上海化学试剂厂; Dextran"T-10
(1)DEAF-52纤维素柱层析
Dextran T-50、 Dextran T-70、 Dextran T-100、 Dextran
先将DEAE-52纤维素用蒸馏水溶解,使其充分
T-200均为色谱纯, Sigma公可;苯酚、硫酸、盐酸、氢浸胀后,用0.5mL.L的NaOH溶液浸泡6h,用蒸馏
氧化钠、无水乙醇、氯仿、正丁醇等均为国产分析纯。水洗至中性,然后再用0.5mL.LHI溶液浸泡,再用
1.13仪器与设备
蒸馏水洗至中性进行装柱。
FZ102型微型植物试样粉碎机:北京市光明医
将经过透析的块菌多糖样液进样,洗脱液为蒸
疗仪器厂
馏水和0.3mol.L-的NaOH溶液进行阶段性洗脱,柱
KUBOTA3740型冷冻离心机: KUBOTA Corpo-规格为40x50omm,柱床高为350m,流速为4mL.
ration
minl,进样量为4mL,每管收集4mL,然后各取其
UV-2000紫外分光光度计:上海尼柯仪器有限1mL,用苯酚硫酸法进行跟踪检测,绘制洗脱曲线。
公司
(2)Se
G-100凝胶柱层析
BT-100恒流泵:上海沪西分析仪器厂
这种方法是根据活性多糖的分子量的大小和形
自动收集器:上海泸西分析仪器厂
状而对其进行分离的,一般分离介质采用葡聚糖凝
40x500mm层析柱、16x1000mm层析柱:上海精胶、琼脂糖凝胶等,本研究采用葡聚糖凝胶
科实业有限公司
Sephadex-100对经DEAE-52分离后的多糖组分
高效液相色谱仪:日本岛津RI)-10A检测器,进行纯化分离
IC-10AT泉
具体方法为:将 Sephadex-100凝胶用蒸馏水
色谱柱 cosmosil:日本 NACALAL公司
常温下浸溶,然后在沸水浴中5h让其充分吸水浸
其他均为实验室常用设备
胀,使用分液滿斗装柱。使用蓝色葡聚糖和重铬酸钾
1.2试验方法
使凝胶柱平衡,将通过DEAE-52分离的不同组分的
1.2.1块菌多糖的纯化工艺路线
块菌多糖进样,洗脱液为蒸馏水,柱规格为16
打碎匀浆的块菌一水提醇沉法提取一块菌多糖1000mm,柱床高度为90omm,流速为1.5mL.min-,每
水提物一 Sevag法去蛋白一浓缩透析去除小分子杂管收集3mL,然后分别取其ImL,用酚硫酸法迸行眠
质一DEAE-52纤维素柱层析一 Sephadex-100杜层踪检测,绘制洗脱曲线
析一分离后分别集中收集浓缩一真空冷冻千燥一得1.2.4块菌多糖的纯度鉴定
到多糖纯品一冷藏备用
(1)PST-W的纯度鉴定
(1)水提醇沉法条件为:时间40min,液料比
高斂液相色谱法(HPIC):日本岛津高效液相的
25:1,提取温度75℃。
色谱仪,检测器为RID-10AT(示差检测),泵为IC
2) Sevag y法去蛋白:先配置的 Sevag试剂一按10AT,流动相为超纯水,流速为0.4mnL.min,柱箱温
照体积比(氯仿