多脂鳞伞紫外线诱变育种.pdf

2012Vol.31No.3
a66· Serial No.240
China Brewing
Research Report
多脂鳞伞紫外线诱变育种
解生权,苏利,陈伟,朱琳,马天卉,全艳玲
(1.辽守经济职业技术学院生物工程系,辽宁沈阳11012;2.辽宁科技大学化学工程学院,辽宁鞍山11405)
搞要:该研究用己经选育出来的多脂鳞伞蘭株作为出发蘭株,利用紫外线对其孢子悬液进行诱变处理。结果表明,在紫外线照射
65秒的情况下,得到一株正突变菌株(①V-65),经过斜面培养和发酵实验证实,其菌丝生长比出发菌株旺盛、菌丝产量提高20%;经过
6代的迕续传代培养,其遗传性状较为稳定
关键词:多脂鳞伞;紫外诱交;蘭种筛选
中图分类号:Q93-331
文献标识码:A文章编号:02545071(2012)03-0066-02
Ultraviolet mutation screening of Pholiota adipose
XIE Shengquan SU Li, CHEN Wei, ZHU Lin MA Tianhui, QUAN Yanling?
( 1. Depatment of Bioen neng Liaoning Econom Vocational Technology Institute, Shenyang 110122, China
2. School of Chemical Engineering University of Science and Technology, Anshan 1/4053, China)
Abstract: Using an obtained Phliotaadipose s rain as tar in strain pore suspension was induced by ultraviolet The results showed that a
mutant strain UV-65 was obtained af 65 ramet under UV. It was demona ed tha U65 w onger an the starting strain and the pro-
duction of mycelia inceased y 20% It ad stable inheritance afler six continuously passages
Key words Pholiota adipose, ultraviolet mutagenesis; screening
多脂鳞伞又称黄伞、柳蘑,各地名称不一,是食药两用毒,然后将子实体悬挂在裝有玻璃珠和无菌生理盐水的
珍稀真菡,含有丰富的蛋白质、脂肪、纤维、维生素、核酸、500mL广口瓶中,置于(262)℃、散射光继续培养,待瓶中
多糖等生物活性物质,可以预防多种细菌感染叫;并且具生理盐水表面漂浮大量红褐色孢子时将子实体取出。(5)用
有较强的抗肿瘤作用?。本课题组用从野生环境中选育出血细胞计数仪计数孢子悬液的浓度,并用生理盐水将其稀
来的菌株,经过几年的发酵培养和栽培发现,菌丝生长强释成浓度为10mL的悬液,作为诱变用孢子悬液。
度较弱、发酵生产菌丝产量不如人意。因此,对已有菌株1.3.2紫外线诱变
进行紫外线诱变,以期获得生长旺盛、菌丝产量有所提高
取上述诱变用孢子悬液10mL放入小12cm、带有转子的
的突变蘭株。
无菌平皿中,置于磁力搅拌器上,缓慢转动转子,并用30W
1材料与方法
紫外灯照射,照射距离为30cm(紫外灯预先开启30min
1.1茵种
照射时间分别为5s、158、3255、35、455565、75-85s、95s。
野生环境中选育出来的菌株。
每个照射时间做3个平行试验。照射结束后将3个平行试验
1.2培养基
得到的悬液混合在一起,并稀释到10个/mL。
(1)斜面培养基叫:马铃薯100g(去皮),胡萝ト100g,琼1.3.3死亡率测定
指20g,葡萄糖20g,磷酸二氢钾2g,硫酸镁1g,蛋白胨10g,
将上述诱变后的稀释液混匀取0.1m涂布在平板培
水100omL。2)原种培养基!柳木屑80%,麩皮106,玉米粉养基上(培养基成分同斜面培养基),每个照射时间段涂布
7%,石音粉2%,葡萄糖1%,含水量60%。(3)栽培培养基:5个平板,置于(26±2)℃避光培养,并用未经紫外线照射的
柳木屑80%,麸皮18%,石膏粉2%,含水量60%。(4)发酵培相同浓度的孢子悬液作对照。培养72h后,计数薗落数量平
养基:马铃薯100g(去皮),胡萝卜100g,葡萄糖20g,磷酸均值,并计算死亡率。
二氢钾2g,硫酸镁1g,蛋白胨10g,水1000mL
死亡率对照的菌落数,诱変后的菌落数x100
1.3方法
对照
的菌落数
1.3.1孢子的生产
随着照射时间的延长,死亡率也随之上升,见附图
(1)将出发菌株接种到斜面培养基上,扩培成母种。1.3.4目标菌株的筛选
(2)利用母种制作原种。(3)栽培。(4)当子实体菌盖即将开
根据文献资料报道,利用紫外线诱变真核微生物
放,孢子未弹出时,将子实体采下、修剪菌柄并进行表面消的孢子,正突变的发生几率的峰值经常出现在死亡率在
收稿日期:2011118
基金项目:辽宇省教育厅基金项目([2010191)
作者筒介:解生权(196-),男,辽宁鞍山人,副教授,主要从事微生物教学研究工作