GB∕T 33412-2016 生物制品中羟基柠檬酸的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS71.040.30
中人民共和国国家标祖准
GB/T33412-2016
生物制品中羟基柠檬酸的测定
高效液相色谱法
Determination of hydroxycitric acid in biochemical products-
HIPLC method
2016-12-30发布
2017-07-01实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会发布
B/T33412-2016
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本标准由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC387)提出并归ロ。
本标准起草单位:上海市计量测试技术研究院
本标准主要起草人:刘刚、李兰英、丁敏、闻艳丽、徐勤、许丽。
B/T33412-2016
生物制品中羟基楟檬酸的测定
高效液相色谱法
范围
本标准规定了用高效液相色谱法測定保健(功能)类生物制品中羟基柠檬酸含量的方法。
本标准适用于口服液、胶囊、颗粒冲剂等生物制品中羟基柠檬酸的测定。
规范性引用文件
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件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
原理
试样中羟基柠檬酸用水提取,经离心后?上清液经0.45pm微孔滤膜过滤,经高效液相色谱分离,紫
外检测器检测,外标法定量,测定羟基柠檬酸的含量
试剂和溶液
除另有说明,本方法使用的试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。
4.1甲醇:色谱纯。
4.2磷酸
4.3体积分数0.1%磷酸水溶液:确吸取1mL分析纯磷酸,用水稀释并定容至1000ml
4.4羟基柠檬酸标准品(CAS号:6205-14-7):纯度≥98%。
4.5羟基柠檬酸标准储备液:准确称取1g(精确至0.001g)经过95℃士2℃干燥2h的羟基柠檬酸标
准品,加适量水溶解,转移至100mL容量瓶中,用水定容,摇匀。羟基柠檬酸标准储备液浓度
为10.000mg/mL。
4.6羟基柠檬酸标准溶液:使用前,将10.000mg/mL的羟基柠檬酸标淮储备液用水逐级稀释,制成浓
度为1.000mg/mL、0.500mg/mL、0.200mg/mL、0.100mg/mL、0.010mg/mL、0.001mg/mL的羟基
柠檬酸标准溶液。
仪器与设备
实验室常规设备及下列各项:
5.1高效液相色谱仪:配紫外检测器
5.2分析天平:感量0.01g,0.001g
5.3高速离心机:10000g。
5.4滤膜:0.45gm,水相。
ww.
GB/T33412-2016
5.5超声波清洗器。
5.6研钵。
5.7常用玻璃量器,A级。
试样的制备
6.1固体试样
从研磨成粉末(胶囊取胶囊内容物)的混匀试样中称量1.0g试料(精确至0.01g),置于烧杯中,加
水40mL,超声波清洗器100W超声20min,冷却至室温后转移至50mL容量瓶,并加水定容。
6.2液体试样
从试样中准确移取试料1.00mL.加水稀释并定容至10mL。
上述上清液即为试料溶液。
分析步骤
7.1液相色谱参考条件
色谱柱: Atlantis T3C1色谱柱(150mmX4.6mm,5gm),或相当者;
流动相:0.1%磷酸水溶液十甲醇,体积比(99+1)
流量:0.6mlL./min
柱温:室温;
检测波长:210nm
进样量:10gL。
7.2绘制标准曲线
分别吸取羟基柠檬酸系列标准溶液,用0.45gm滤膜过滤,注人高效液相色谱仪,进样10rL,进行
测定,以各标溶液浓度峰面积为纵坐标,以标准溶液标准浓度值为横坐标,绘制标准曲线,并关联获得
标准曲线公式,标准曲线的相关系数应该不小于0.999。羟基柠檬酸标准品色谱图参见附录A中
图A.1
7.3样品分析
吸取试料溶液(6.2)用0,45gm滤膜过滤,注入高效液相色谱仪,在7.2相同条件下进行测定。根
据色谱峰而积,利用线性回归方程计算试料溶液中羟基柠檬酸的含量。典型样品色谱图参见图A.2。
结果计算
8.1固体试样
固体试样中羟基柠檬酸的含量(质量分数)按式(1)和式(2)计算
A
B/T33412-2016
式中:
一从标准曲线求得试料的质量浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL);
A试料的色谱峰面积(高)
标准曲线截距;
标准曲线斜率;
z一样品中被测组分质量分数,单位为毫克每克(mg/g);
V一试料溶液定容体积,单位为毫升(mL)
m一称取试料的质量·单位为克(g)。
8.2液体试样
液体试样中羟基柠檬酸的浓度按式(3)计算:
式中:
P一试样中被测组分质量浓度,单位为毫克每毫升(mg/mI)
移取试料的体积,单位为毫升(mL)。
方法特性
9.1测定范围
进样10l,在相关系数大于或等于0.999的前提下?羟基柠檬酸的线性測量浓度响应范围为
0.001mg/mL~1,000mg/mL。
9.2回收率和精密度
参见附录B