GB T 24722-2009 路面标线用玻璃珠.pdf

第11期
化木聚糖酶一个很好的尝试,为今后的木聚糖酶固蛋白的交联作用,常引起蛋白质高级结构的改变,使
定化开发新的固定化方法提供了很好的思路。
酶失活,因而活力损失较大;但酶与载体结合较紧
固定化酶方法的分类
朱启忠2?课题组对木聚糖酶的固定化,基本上
3.1吸附法
都是采用交联法。如采用壳聚糖载体,以戌二醛为
吸附法是依据酶和载体之间的静电、表面张力、交联剂,对青霉菌m8来源木聚糖酶进行固定,酶活
亲和力等的作用,而使酶固定在载体表面的方法。回收率为46.6%,酶的最适pH由4.6降至3.8,且
吸附法可分为物理吸附法和离子吸附法。物理吸附固定化酶在60~75℃C都具有较高活性,Km值也有
法是使用具有高度吸附能力的硅胶、活性炭、多孔玻所降低。由于交联法条件较激烈,常出现扩散限制
璃、石英砂等吸附剂将酶或细胞吸附到表面上使之使用有一定难度,因此,许多研究采用吸附、交联相
固定化。这种方法,操作简单,反应条件温和,载体结合的方法。
可以反复利用,但结合不牢固,酶易脱落。
3.4其他方法
Gouda?采用成二醛活化的离子交换树脂
为了达到更好的固定化效果,多种方法相结合
Duolite-147固定化曲霉木聚糖酶,获得54%的比是目前采用最多的方法。蔡敬民[2的研究则以壳
活力,得到的固定化酶稳定性良好。艾志录以树聚糖吸附、二醛交联固定化宇佐美曲霉木聚糖酶,
脂为载体对木聚糖酶进行了固定化,筛选出固定化获得了较高稳定性的木聚糖酶。固定化酶的半失活
效果较好的724和D380两种树脂;对含伯氨基的温度比游离酶高,由51℃升至71C,Km值由游离
离子交换树脂D380,采用戊二醛进行交联固定化,酶的12mg/mL增加到15mg/ml,最适反应温度
研究并优化了其固定化条件。
也由55C增加到71C,而最适反应pH由4.6下
3.2共价结合法
降到3.8。该固定化木聚糖酶可用于制造低聚木
共价结合法是指酶分子的非必须基团和载体表糖。经过10次连续应用实验后,该固定化酶的活力
面的活性功能基团通过形成化学共价键实现不可逆保持在81%。 Abdel Naby2-系统的研究了不同载
结合的酶固定化方法。该方法固定化酶与载体连接体、不同方法固定化 Aspergillus NRC107木聚糖酶
牢固,有良好的稳定性及重复使用性,成为目前研究和β木聚糖苷酶的效果和固定化酶的特性,认为单
最为活跃的一类酶固定化方法。
宁壳聚糖物理吸附、 Dowex50w离子结合、壳聚糖
Cano报道了一种新的固定化木聚糖酶的方珠用戊二醛共价交联、聚丙烯酞胺凝胶包埋都可以
法,将聚砜类材料,经丙烯酸活化后,制备成聚矾薄得到最高活性,且最适温度都有所提高,与游离态酶
膜,将引入的羧基基团,与emdo-1,4- xylanase(E.相比固定化酶的最适pH值降低,Km值升高,在连
C.3.2.1.8)土的氨基共价结合,得到固定化酶。在续操作填充床式反应器的操作稳定性提高,売聚糖
扫描电子显微镜和原子力电镜下观察固定化前后载共价结合操作稳定性最高,连续40d操作稳定性良
体材料物理特性没有太大的改变,实验表明通过固好:物理吸附和离子结合法固定化酶操作稳定性差,
定化后的酶比自由酶具有较高的活性。另外,发现而包埋法则显示出低酶活性和较高的操作稳定性。
固定化酶对于pH变化的耐受性和耐热性明显高于 Ines Maalej- Achouri23研究了不同载体,不同方法
游离酶,这对于固定化木聚糖酶的下一步应用有很固定化 Talaromyces thermophilus木聚糖酶,并对
大参考价值。 Sundar-将纯化后的曲霉木聚糖酶比了固定化木聚糖酶的效率。实验结果证明采用成
通过重氮化方法固定于聚苯乙烯微珠上用于纸浆漂
醛交联法,明胶固定化酶,固定化率为98.8%,酶
白。通过这种固定化方法连续纸浆漂白的模式得以的活化回收率为99.2%,可应用于农业废弃物制备
实现,最佳的纸浆漂白条件为反应温度为60℃纸浆低聚糖。
的流速为2mL/min,流量为5%(w/),纸浆卡伯值4结東语
从66减少到20,试验证明该方法优于传统的以氯
木聚糖酶在造纸、食品、能源、恫料及环境等领
进行漂白的方法。
域具有巨大的应用价值,这已在世界范围内得到确
3.3交联法
认,固定化木聚糖酶是提高木聚糖酶稳定性、扩大适
交联法是利用双功能或多功能试剂,直接与酶用范围、降低生产成本及重复利用的最优方法,更是
表面的基团(如氨基酸、羟基、巯基、咪唑基)发生反现在科学工作者研究的热点和难点,虽然已有报道
应,使其彼此交联形成网状结构的固定化酶,其结合和文献对木聚糖酶的固定化进行了探讨和研究,由
力是共价键。此法制备麻烦,双功能基团试剂与酶于木聚糖为大分子底物,底物的空间位阻和载体扩