GBT5009.189-2003 银耳中米酵菌酸的测定.pdf

ICS67.040
中华人民共和国国案标
GB/T5009.189--2003
部分代替GB11675-1989
银耳中米酵菌酸的测定
Determination of bongkrekic acid in tremella
fuciformis berk
2003-08-11发布
2004-01-01实施
5a0
中华人民共和国售发布
GB/T5009.189~2003
前言
本标准代替GB11675-1989《银耳卫生标准》中5.1米酵菌酸的测定。
本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口
本标准由河南省食品卫生監督检验所、河南省南阳地区卫生防疫站负责起草
本标准主要起草人:任中善、马军、赵国庆、张丁、韦喜亭。
501
GB/T5009,189-2003
引言
米酵菌酸[ bongkrekic acid(BA),即酵米面黄杄菌毒素A( flavodoxin A)]是由椰毒假单胞菌
( seudomanas cocovenenans)产生的一种可以引起食物中毒的毒素。系统命名为:3羧甲基17-甲氧基
6,18,21-三甲基-廿二碳-2,4,8,12,14,18,20七烯二酸。
GB/T5009.189~-2003
银耳中米酵菌酸的测定
范围
本标准规定了银耳中米酵菌酸的测定方法。
本标准适用于银耳中米酵菌酸的测定
蓐层色谱测定法
2原理
试样中的米酵蔤酸经提取、净化及浓缩后,根据其在短波紫外光GF硅胶薄色谱上显示祭色点
的最低检出量测定含量。
仪器
3.1层析樽(内径长X宽×高,25cmX6cmnx4cm)。
3.2GF23硅胶薄层50mm×200mmn×0.3mm),自制,经110℃~115℃活化2h~3h,置干燥器中可
保存一周。
3.3紫外线灯(波长254nm)。
3.4紫外分光光度计。
4试剂
本标准所用的试剂除特殊规定外,均为分析纯,水为蒸馏水或同等纯度的水,溶液为水溶液。
4.1硅胶:GF层析用。
4.2薄层色谱展开剂:石油藤-无水乙醚-冰乙酸[60+40+1.5]
4.3米酵茵酸标准溶液:称取米酵菌酸标雅品,用甲醇配制成每毫升含有米酵菌酸20g供测定用,置
于4℃冰箱中避光保存
4.4甲醇
4.5冰乙酸。
4.6石油醚,沸程30℃~60℃。
4.7无水乙送。
4.8三氯甲烷。
4.985g/100mL磷酸。
4.1040g/L碳酸氢钠水溶液。
4.116mol/L盐酸。
5分析步骤
5.1米酵菡發的提取
干银耳试样经粉碎过40目筛后,称取20g,置具塞锥形瓶中,加人甲醇20mL,于室温中避光浸泡
1h,然后再加入三氯甲烷80mL和85g/100mL磷酸0.2mL,鲜银耳试样经剪碎、蘑细及混匀后称取
10g,加人甲醇16mL于室温中避光浸泡1h,然后再加人三氯甲烷64mL和85g/100mL的磷酸
0.16mL;振荡30min过滤,干银耳取滤液50mL,鲜银耳取滤液40mL。
GB/T5009,1892003
将以上液移入分液漏斗中,加人与滤液体积相同的碳酸氢钠水溶液,振摇2min,静置分层,用带
自动控制球吸管吸出上层于另一分液漏斗中,再用碳酸氢钠水溶液重复提取两次,每次10mL,轻摇,静
置,将三次碳酸氢钠水层合并,加入三氯甲烷25mL,振摇2min,静置分层后弃去三氯甲烷层,于分液漏
斗中慢慢滴人6mol/L盐酸以该溶液pH至2~3,加入石油(沸程30℃~60℃)50mL(鲜锒耳试样
加40mL),振摇3min,静置分层,取出石油谜层于梨形瓶中,再重复用石油藤30mL和20mL各提取
次(鲜银耳试样两次均为20mL),将石油醚层并入同一瓶中,于40℃水浴中减压吹气浓缩至于,用甲
醇移至带1mL刻度的浓缩管中,于40℃用减压法浓缩至0.2mL以下,并用少许甲醇洗管壁,继续浓
缩至干,加甲醇0.125mL,将干物质溶解,混匀,作为样液以供薄层色谱测定用。
5.2薄层色请测定
以薄展板的短边为底边,距底边3cma的基线上用微量注射器滴加20g/mL标准液8L与10L
两个点,以及样液两个点,每点10L(鲜银耳试样滴加20正),在样液的一个点上再滴加20gg/mL标
准液10uL。用展开剂展开16cm,取出挥干。在254nm紫外灯光下观察结果如下
)标准点应出现黑色点;
b)如样液点在标准点相应位置上未出现黑色点,则试样中米酵菌酸的含量在测定方法灵敏度
0.25gg/g以下;如在相应位置上有黑色点,而另ー点中样液与标准液点重叠,则为阳性,根据
样液黑点的强度估计减少滴加微升数,或经稀释后再滴入不同徽升数;直至样液与标准色点
的强度与面积一致为止。米酵薗酸的比移值为0,22。
5.3结果计算
见式(1)。
X=0.2y
式中
X一一米酵藹酸含量,单位为微克每克(ug/g);
0.2一米酵茵酸的最低检出量,单位为徴克(ug);
V1一一加入甲醇溶解的体积,单位为毫升(mL);
V2一出现最低检出量时滴加样液的体积,单位为毫升(mL-)
D一样液的总稀释倍数;
m~甲醇溶解时相当试样的质量,单位为克(g
5.4确证试验
对含量高的试样可以进一步作确证试验;将剩余的阳性样液与空白甲醇液分别经薄层分离后,下
并收集与米酵菌酸标准相应的色谱带与空白处硅胶。各加甲醇4mL,于室温中浸泡1h~2h,混匀,离
心,吸出土清液;以空白硅胶甲醇洗脱液作对照,用紫外分光光度计测定,应在267nm和236nm处有
米酵菌酸的两个最高吸收峰。
高压液相色谱测定法
6原理
试样中的米酵菡酸经提取、净化及浓缩后,根据在高压液相色谱上的出峰面积测定含量
7试剂
7.1高压液相色谱洗脱狩:甲醇-水-冰乙酸[75+27+1.7り,在配制前,所用试剂及水均需分别重蒸馏。
7.2其他试剂同4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、4.10、4.11。
5自さ