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科技
析检测
食源性致病菌检测新方法
口杨兴
近年米食品安全得到了世界各国的射免疫法(RI4A)、免疫荧光技术(I1)、酶
EL1SA方法是一种敏感、快速、简单
普遍关注。每年向卫生部上.报的食物中联免疫吸附法( ELTSA)等。
的方法,应用较广。酶联免疫吸附技术的
毒人数逐年递增,且大部分是山食源性
最初应用的免疫学方法为免疫扩散基木原理是将抗原或抗体预先吸附于固
致病菌所引起。据世界卫生组织估计,法,它主要分为単向免疫扩散试验利双相载体表面,再加入受检样品利酶标抗
全世界每年的食源性病患者中,70%向免疫扩救试验,但这两种方法的检出体,进行免疫酶染色,最后经固相载体上
都是山病性微生物引起的。山此可见,灵敏度较低,检测的食品标木需要浓缩,的海催化产生颜色变化,从而判断受检
食源性疾病与食品污染问题已成为世界操作量大、工作繁琐,因而未能推广。RTA样品是否含有用的抗原。同时通过分析
范围内举足径重的公共卫生问题。同时,的应用将同位素测定的高灵敏性和抗原有色产物量可以确定样品中待测物质的
GB29921-2013《食品安全国家标准食抗体反应的高特异性有效地结合在一含量。国内外学者采用酶联免疫吸附技
品中致病菌限最》于2014年7月1日实施,起,使得检测的灵敏度和特异性均有术对不同的细菌进行检测,实验结果表
对食品中致病菌的规定更加严格。所以所提高而且具有简单、快速的特点。R⊥A明 ELISA?法对多种食源性致柄菌的灵敏度
建立有效的食源性致病菌检测体系,快测定食品标木不需要浓缩,1~2d内可出利特异性较好。但LISA对试剂的选择性
速并且准确地完成对食品中致病菌的检结果,检测各种食品中的金黄色葡萄球高,很难同时分析多种成分,且对结构类
测己成为保障食品安全和防止疾病传染菌的灵敏度为1~-10ng/g,但该方法存在似的化合物有交义反应。
的关键。
放射性污染和需要专门的防护设备、检
随着生物技术的进步,除了传统检测仪器等问题,也不易推厂广。
基因芯片技术
测方法外,在食源性致病菌检测领域出
免疫荧光技术()是在将不影响抗
基因芯片技术是上个世纪末诞生的
现了许多比传统方法更快捷、敏感性更原抗体活性的荧光色索标记在抗体(或一项新型生物技术。它是将各种基因寡
好的新技术,如免疫学检测技术和分子抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结核苷酸点样于芯片表面,微生物样品DNA
生物学检测技术等。木文对日前国内外合后,在荧光显微镜下呈现特异性的荧经PCR扩增后制备荧光标记探针,然后再
食源性致病菌的检测方法进行归纳和综光反应,可用来对葡萄球菌、大肠杆菌与心片上寡核苷酸点杂交,最后通过打
述,并对不同方法进行阐述和分柄析。
0157、」氏菌和单核増生李斯特氏菌等描仪定量和分析荧光分布模式米确定检
进行快速检测。此方法的主要特点是特测样品是否存在某些特异微生物。ば检
免疫学方法
异性强、敏感性高、速度快。但存在一些测致病菌原理为:选择细菌的共有基因
检测食品屮致病菌的免疫学方法主不足尚未完全解决,如非特异性染色问作为靶基因,用一对通川引物进行扩增,
要有免疫扩散法、反向间接凝血试验(即题,结果判定的客观性不足,技术程序比再利用心片上的探针检测不同细菌在该
I)、反向被动乳胶凝集试验(RPLA)、放较复杂。
共有基因上的独特碱基,从而区分不同
食品安全导刊2015年6月
分析检测
的细菌,此法还可以道过向寡核苷酸探收、反射、化学发光、荧光和磷光等,在子,通过荧光信号的强弱来实时反应模
针阵列中添加相应的探针米逐步扩大基致病菌检测中最有应用前景的技术包括板的扩增量,最后通过标准曲线对未知
因心片的检测范围,并通过增加和调柊表面等离子共振技术等。表面等离子共模板进行定量分析的方法。实时荧光
探针米逐步提高基因芯片的准确性。基振技术是一种基于反射光谱的非标记检PCR技术采用全密闭管检测,不仪实现
因芯片技术理论上可以在一次实验中检测技术。它将已知生物分子固化在几十对DNA模板定量,还能避免电泳带米的
出所有潜在的致病菌,也可以用同一张芯纳米的金属膜表面,加入能够与之结误差和污染,具有重复性好、白动化程
片检测某一致病原的各种遗传学指标,合的目标生物分子,山此引发的光学信号度高、英时性强和准确性高等特点。实
检测的灵敏度、特异性利快速便捷性都随机被表面等离子共振传感器转化为电时定量PCR类型主要有探针类和利非探针
很高,因而在致病原分析检测中有很好信号进行检测分析。
类炳种。探针类足利用与靶序列特异杂
的发展前景。
交探针指示扩增产物増加,特异性好
聚合嗨链式反应技术
而非探针类是利用染料或特殊设计引
核酸探针技术
聚合酶链式反应技术是在体外合物指示扩増产物增加,特异性不强,但
核酸探针检测技术的依据是核酸杂适条件下,以DNA为模板,以一对人工简便易行。日前在国内外实时荧光定量
交,ば工作原理是两条碱基互补的バA合成的寡核苷酸为引物在耐热DNA滎PCR广泛应用于基因表达研究、病原体
链在适当的条件下可以按碱基互补配对合海作用下特异性扩増目的DNA片段的检测等领域。
原则,形成杂交DNA分子。已知每个生物技术。近年来应用PCR技术检测食源性:食品安全问题关系到国计民生,随
的各种性质和特征都足由其所含的遗传致病的技术有很多,如常规PCR、多重着经济社会的不断发展,必然会对食源
基因所决定,因此,从理论上讲,任何一PCR、实时荧光定量PCR、逆转录PCR、不性致病菌的检测提出越米越多的要求。
个次定生物体特定生物学特征的DバA序对称PCR、免疫PCR、套式PCR和电化学传统的细菌培养、分离、鉴定与检测的技
列都应该是独特的。通过将微生物的特发光PCR等。多重PCR是在常规PCR基础术耗时长且检出敏感性差。但使用传统
征基因的一条DNA链进行标记,即可制上改进并发展起来的一种DNA扩增技检测方法可获得供后续研究的致病菌菌
成DNA探针。标记的方法可分为两种:放术。多重PCR在同一反应体系中同时加落,所以该方法仍是食源性致病菌检测
射性标记探针和非放射性标记探针。放入多对引物,扩增多条目的DNA片段,所的最基本检验方法。
射性探针是以同位素为标记物,常用的以可以同时检测多个目标菌。相对于传
对于食品中的致病菌检测来说,依
同位素包括P、H、S,通过放射白显影统检测方法,多重PCR检测技术可以枚靠单一的手段已不能满足现阶段的检测
检测分析结果;非放射性探针是以生物大地缩短检测时间,且操作简单、特异要求。多种技术的联用可大大提高检测
索、酶和荧光素等为标记物,杂交后通过性和敏感度较高。因此采用多重PCR方的灵敏度,并减少检测时间。随着微生物
酶催化底物显色反应、荧光显微镜或荧法检测多种细菌一自是细闲快速检测的学、生物化学和分子生物学等学科的
光仪检测杂交结果。用大肠杆菌编码葡研究热点。但是多重PCR技术在实际的速发展,各种多功能微生物检测系统的
萄糖醛酸酶的uidA基因设计探针,用以检验工作中还存在一些问题:如提取得研发逐步成为热点。3M分子检测系统就
检测食品屮的总大肠杆菌。
到的DNA片段可能不完整,多组引物之将环介导等温核酸扩増技术(LAMP)和
间的相互扰,高浓度模板对低浓度模生物荧光实时检测技术(BART)结合在
光学生物传感技术
板产生竞争性抑制以及样品中可能含有一起,可实现在分子层面上.对食源性致
光学生物传感器源于传统的物理传PCR抑制物质等。