马来酰亚胺基聚乙二醇单甲醚的合成研究.pdf

承徳医学院学报
JOURNAL OF CHENGDE MEDICAL COLLEGE
Vo.30 No, 203
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(收稿口期:2012-09-07)
护理学档目8张億)
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技术方法
马来酰亚胺基聚乙二醇单甲髅的合成研究
郑霄,李云峰,王良友,尹志峰
(承德医学院中药研究所,河北承德067000
关键词】聚乙二醇;马来酰亚胺基聚乙二醇单甲醚:纯化
【中图分类号】R914.5【文献标识码》A【文章编号1004-6879(2013)01-0053-02
随着生物技术的快速发展,越来越多的蛋白质多肽类mPEG-MAL?。通过对合成mPEG-MAL后处理方法的
药物在疾病的预防和治疗中得到应用。虽然蛋白质多肽类优化选择,得到了产率较高、纯度较高的产物,具有较高的
药物的作用位点专一、疗效确切,但溶解度低、稳定性差、应用价值。
半衰期短、仔在免原性等缺陷,限制了它们的给药途径
材料与方法
和药效的发挥。聚乙二醇(FPEG)修饰可以很好地解决上述1.1试剂单甲氧基聚乙二醇(PEGo~-OH),美国 Sigma
问题"
公司;二氟甲烷、三乙胺、对甲苯磺酰氯、乙醚、邻苯二甲
PEG是一种pH中性、无毒、水溶性较高的亲水聚合酰亚胺钾盐、N,N一二甲基甲酰胺、无水乙醇、水合肼、二
物,由环氧乙烯单体聚合而成。由于PEG反应官能团末端氧六环、马来酸酐、乙酸酐、无水乙酸钠均为分析纯试剂。
羟基的化学性质不活泼而且选择性不强,难以对蛋白质1.2仪器旋转蒸发器RE-52AA,上.海亚荣生化仪器
和多肽类药物进行定点修饰,通常需要对其末端的官能厂:WFI1-203三用紫外分析仪,上海精科实业有限公司;
团进行活化,然后将活化后的PEG衍生物通过化学方法高效液相色谱仪,美国 Alltech公可;分析柱 A ccurasill C
偶联到药物上。在对蛋白质多肽类药物巯基定点修饰中,反相硅胶柱(4.6×250mm),大连依利特分析仪器有限公
使用较多的活化PG是马来酰亚胺基聚乙二醇单甲醚司
nPEG-MAL)。为避免在修饰过程中发生交联和团聚,通1.3合成路线见附图。
常采用单甲氧基聚乙二醇(mPEG-OH)作为修饰剂的合
成原料。
mBb0r+x、tm、ipr,0な
本研究首先在碱的催化下,用mPEG-OH与对甲苯
磺酰氯(Ts-CI)反应得到单甲氧基聚乙二醇对甲苯磺酸
酣(mPEG-OTs),然后根据盖布瑞尔合成法原理、以邻苯
二甲酰亚胺钾盐为亲核试剂与mPEG-OTs反应,生成单
收具
HEG.数 CHCNI
甲氧基聚乙二醇的邻苯二甲酰亚胺衛生物,再与水合肼反
应肼解生成氨基化单甲氧基聚二醇(mPEG-NH2),出马
附图mPEG-MAL合戒路线
来酸酐与mPEG-NH2发生缩合,再经脱水得到最终产物1.3合成方法
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Vol.30No.12013
1.3.1 MIPEG-OT'S的制备:称取mPEG-OIg(mol)1:1、3:1反应,用RP-HPLC监测反应进程,观察mPEG
置于茄形瓶中,加入20ml二氟甲烷溶解,再加人0.86ml三MAL峰、多肽峰与新物质峰的生成变化,其保留时间符合
乙胺(6mmol)和1.14g的对甲苤磺酰氯(6mmol),室温下搅理论值,证实其活性。
拌反应24h。反应过程中用T互C(甲醇:氯烷=:6)检测3讨论
反应进程,待原料点消失,表明反应完全,依次用0.1%柠襪
在mPEG-MAL的合成中,经过两种不同的后处理
酸钠溶液、饱和氟化钠溶液三遍,无水硫酸钠干燥。减压纯化方法。除上述方法外,有文献报道将反应结束后的反
旋蒸除去溶剂,加无水乙醚沉淀出固体,抽滤,产物为白色应液过除去不溶物,80℃减压旋蒸除去溶剂,残余物加
出体,放入干燥器中干燥。得到产品4.85g,产来97%。
入二氯甲烷溶解,再加入适量活性炭,放置30min。滤除酒
1.3.2mPEC-NH2的合成:将4.5 g MPEG_(UIis.9mnol)性炭,减压旋蒸溶剂,加入无水乙醚沉淀,干燥得到终产
溶于I5m1N,N-:甲基甲酰胺中,加入1g邻苯甲酰胺物mPG-MAL则经过多次重复和比较试验后,在RP
钾盐(5.4mrol),120C下氮气保护反应4h。90℃减压旋蒸除 HPLC检测下,采用此方法在较少剂量时,可以得到和前
去溶剂,将残余物溶于35ml无水乙醇,加入3.5nl水合肼,述方法产物纯度相当的产物,但在加大剂量时,用此法!
90℃加热回流反应4,60℃减压旋蒸除去溶剂,产物溶于こ无法得到所要产物。分析可能是大剂量反应时,要长时间
氯甲烷,滤去不溶物,依次用纯水、饱和氯化钠溶液洗三遆,高温旋蒸除去溶剂,使mPEG-MAL中的五元环断裂,产
无水硫酸钠于燥。TLC点板。减压蒸去溶剂,加无水乙醚沉生了其它副反应,破坏了原有产物
淀出固体,抽滤,产物为白色粉末状固体,放入干燥器中干
本研究比较了几种后处理纯化方法,进行了多步的
燥。得到产品4.2g,产93%。
纯化操作,简化了操作步骤,优化了纯化方法;减少了
1.3.2mPLG-MAL的合成:将3 g m]EG-NW-(0.6 ommon)物损失,得到的产物纯度较高,由 MPEG-NI2得到产
溶于30ml氧六环中,在80℃磁子搅拌的条件下与0.24g物mPEG-MAL的产率达到76%,高于其它文献记载的
马来酸卤(2.4mmol)反应30min。待反应结束,于55℃下旋48%?。本研究可为实验室或其它单位合成mPEG-MAL
蒸除去二氧六环,乙礎沉降,干燥。将所得固体溶于30ml提供借鉴鈴验
乙酸酐,加入g无水乙酸钠,100℃下慌拌反应45mnin。滤【参考文献】
除反应液中的固体,向反应液中加入10倍乙酸酐体积的[1]路娟,刘清ヒ,罗国安,等、药物的聚乙二醇修饰研究进
纯水,然后用二氯甲烷苄取水层三次,二氯甲烷层经饱和
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氟化钠溶液洗に次后,无水硫酸钠干燥。TLC检测。减压2] Zalipsky S. Chemistry of polyethylene glycol conjugates with
蒸去溶剂,乙醚沉降,抽滤,得到淡褐色固体2.3g,产率
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76"
3 KOTP The syon sis of b it d mtool e oo
2结果
derivatives