第44卷
分析化学( FENXI HUAXUE)研究报告
第1期
2016年1月
Chinese Journal of Analytical Chemistry
19~24
DOI:10.11895/j.isn.0253-3820.150404
高效液相色谱-串联质谱法测定儿童和成人尿液中
双酚A、四溴双酚A和
辛基酚张圣虎′张易曦2吉贵祥徐怀洲刘济宁石利利
(环境保护部南京环境科学研究所,南京210042)2(贵州大学资源与环境工程学院,贵阳550025)
摘要采用高效液相色谱-串联质谱法定量检测人体尿液中痕量双酚A、四溴双酚A和
辛基酚。将解冻后
的尿样酶解,经液液萃取、旋蒸至干,甲醇定容后分析。3种目标物质在0.2~50g/L质量浓度范围内线性
关系良好,相关系数均大于0.99,定量限(1.0Q)在0.05~0.27g/L之间。在5,10和50g/L加标水平下
平均回收率为85.7%-118.6%,相对标准偏差RSD(n=3)为4.1%~10.5%。20组儿童与成人的尿样结果
表明,尿样中均检出3种目标物,其中,四溴双酚A和辛基酚在儿童及成人尿样中的暴露浓度基本相同,但是
双酚A的暴露水平具有显著性差异(儿童>成人)。
关键词双酚A;四溴双酚A;辛基酚;高效液相色谱-串联质谱法;儿童;成人;尿液
1引言
双酚A( Bisphenol A,BPA)、四溴双酚A( Tetrabromobisphenol A, TBBPA)和辛基酚(4-Tert- octyle
nol,OP)作为典型环境内分泌干扰物-“已经引起人们的广泛关注。这3种化合物一般可以通过呼吸
道和消化道等途径进人体内,流经血液、肝脏和肾脏,经过尿液排出体外2?。生物检测结果表明,在
人体尿液8、血液90、母乳,2、胆汁,、肝脏等生物样品中均含有BPA和OP。毒理研究表
明,较低浓度的BPA对小鼠具有雌激素效应1?,BPA和OP都可以通过调节2目标基因对小鼠产生内
分泌干扰效应叨。 TBBPA可以干扰哺乳动物正常生殖行为〔8,通过与甲状腺激素受体结合产生内分
泌干扰效应?
目前,水体中BPA、OP和 TBBPA含量的分析方法已经比较成熟,但是关于人体尿液中3种化
合物同时测定的研究鲜有报道。此外,尿液分析中多采用固相萃取法,16作为前处理方法,但对于
大量样品检测时,存在费用较高、操作步骤较多的缺点。因此,本研究釆用液-液萃取的前处理方法,建
立了高效液相色谱-串联质谱(HPIC-MS/MS)分析技术,同时检测成人和儿童尿液中BPA,OP和TBB
PA的含量,并对成人和儿童尿液中3种内分泌干扰物的暴露水平作了初步分析评价。
2实验部分
2.1仪器与试剂
AG-285电子天平(瑞士 Mettle公司);数显往复振动摇床(德国IKA公司);旋转蒸发仪(瑞士
BUCHII公司);高效液相色谱-串联质谱仪(LC- Agilent Technologies1290 Infinity,MS- AB SCIEX QTRAP
400,美国);Mii-Q超纯水仪(美国 Millipore公司); Centrifuge5430R台式高速离心机(德国 Eppendorf
公司)
双酚A、四溴双酚A和辛基酚(纯度>97%,美国J&K公司);甲醇(色谱纯,德国 Merck公司);氨水
(色谱纯,国药集团药业股份有限公司);B-葡萄糖苷酸酶(5.0x10°~2.0x10umis/ mg protein)和硫酸酯
酶( Sulfatase≥1000 units// g solid)购自美国 Sigma Aldrich公司
2.2实验条件
2.2.1质谱条件电喷雾离子源(ESI);多反应离子监测(MRM);负离子模式;离子源温度:400℃;
2015-05-18收稿;2015-09-18接受
本文系国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(No.2013A06A308)
E-mail: sll@ nies. org
分析化学
第44卷
离子喷雾电压:5500V;气帘气压力:0.207MPa;喷雾气压力:0.241MPa;辅助加热气压力:
0.276MPa。其它参数见表1。
表1双酚A、四溴双酚A和辛基酚的多反应离子监测
Table I MRM Parameters of bisphenol A(BPA), tetrabromobisphenol A(TBBPA) and 4-tert-octylphenol(OP
尹离子
子离子
碰撞能量
去簇电压
人日电压
出口电压
化合物
Parent ion
Daughter ion Collision energy
Declustering
Entrance
elision cell
Compo
(m/x)
potentia
t/7
potential
potenlial
(V)
双酚A
Bisphenol A, BPA
227,0
132.9
四溴双酚A
Tetrabromobisphenol A
542.7
417,9
辛基酚
4-tert-octylphenol, OP
205.2
132.9
25.90
2.2.2色谱条件 ZORBAX Eclipse Plus C3色谱柱(150mnx2.1mm,3.5m);流动相:0.02%
(VV)氨水(A)和乙腈(B);线性梯度洗脱:0~2min,95%A;3~5min,80%A;6~8min,80%
40%A;9~12min,40%~10%A;13~14min,10%-95%A。柱温:40C;进样体积:5uL。
2.3样品前处理
2.3.1酶解取尿液10mL,置于15mlL具塞玻璃管中,依次向尿液中加入pH5.5NaAc-HAc缓冲溶
液1mL、B-葡萄糖苷酸晦和硫酸酶混合液(30 units,/mLβ-葡萄糖苷酸酶和60 unts/mL硫酸酯酶)
100L,混合均匀,37℃水浴2h后,冷却至室温。
2.3.2液液萃取将酶解后的尿样转移至125mL分液漏斗中,用二氯甲烷-正已烷(4:1,Wの混合液
0mL萃取两次,萃取时间15min,合并萃取液,并置于旋转蒸发仪上旋转蒸发至干,用甲醇定容至
1mL,离心(20000r/min,3℃)6min,收集上清液,供HPLC-MS分析。
2.4质量控制与保证(QA/QC)目标化合物通过与标样的保留时间(2%以内)和选择离子的峰面积
比例(20%以内)比较进行定性确认,并采用最高丰度或背景于扰最少的选择离子进行定量分析。每一
组样品(10~15个)添加1个基质空白、1个样品重复和1个基质加标回收作为质量控制。方法空白中
无目标化合物检出。
3结果与讨论
3.1流动相与质谱条件的选择
参考本课题组前期对流动相和质谱条件的优化结果;空白尿样和标准溶液中BPA、 TBBPA和OP
的质量色谱图分别见图1和图2。
205.2/132.9
OP
Iamaw
?1205.2/132.9
7.0/132.9
2210132.9
TBBPA
总T8ENA_1369
542.7417.9
23456789101112
t(min)<