大豆异黄酮测定方法的研究.pdf

CHINA OILS AND FATS
2010Vol.35No.
检化验
大豆异黄酮测定方法的研究
孟橘,倪芳妍,夏天文
(国家粮食备局西安油脂科学研究设计院,西安710082)
摘要:对HPLC法测定大豆异黄酮的方法进行了研究。结果表明,采用C18色谱柱,柱温40℃,以
甲醇一冰醋酸水溶液为流动相,流速1.0mL/min,254nm紫外检测器进行检测,其重复测定结果的
相对标准偏姜均小于5%,人员之间重复定结果的平均值接近,相对标准偏差在0.28%~3.78%
之间,回收?在95.15%~104.92%范围内,相对标准偏差均小于2%。所建立的HPLC法适用于
大?异黄酮的测定。
关键词:大豆异黄;测定;HPIC法
中图分类号:TS229;1Q460文献标志码:A文章编号:1003-7969(2010)03-0078-02
大豆异黄酮是大豆生长中形成的一类次生代谢1.3试验方法
产物,它具有抑制肿瘤生长、降低心血管疾病、预防1.3.1标准溶液的配制标准储备液:准确称取标
和治疗骨质疏松以及缓解妇女更年期综合症等多种准物质大豆甙、染料木甙、黄豆黄甙、大豆甙元、染料
生理保健作用-。大豆异黄酮产品已在国外广泛木素及黄豆黄素各0.0250g,分别用80%乙醇溶液
应用,国内也越来越受到重视,一些大的制药厂和保溶解,定容至50mL,此时质量浓度为500pug/mL。
健食品厂也陆续加人大豆异黄酮产品的研发行标准使用液:分别准确量取标准储备液各1mL,配
列。天然大豆中含有的大豆异黄酮主要包括6制成10mL的混合标样,使各标样的质量浓度均为
种成分一大豆甙、大豆甙元、染料木甙、染料木素、50g/mL
黄豆黄甙及黄豆黄素等。
3.2试样溶液制备准确称取(5±0.5)mg大
大豆异黄酮的测定方法主要有高效液相色谱豆异黄酮粉,加80%乙醇溶解,定容至10mL,用超
(HPLC)法、高效液相色谱一质谱联用法、毛细管电声波振荡助溶10min,使样品充分溶解后,用高速离
泳法及紫外分光光度计法。HPLC法主要采用梯度心机在3000r/min离心5min,取上清液用针头过
洗脱,紫外或二极管阵列检测器测定,是目前主要的滤器(0.45m)过滤后,即为试样溶液。
检测方法6?。本文对HPLC法测定大豆异黄酮的2结果与分析
条件进行研究,以期为大豆异黄酮的开发提供参考。2.1HPLC法测试条件的选择
材料与方法
2.1.1色谱柱的选择由于长期进行检测,要选择
1.1试验材料、仪器
稳定、不易损坏的色谱柱。通过比较各文献中的方
大豆异黄酮粉(厂家提供),含量≥50%。
法以及对各个检测机构、生产厂家的了解,目前大豆
Agilent1100高效液相色谱仪,进样器(进样量异黄酮测定中最常用的色谱柱是C18柱,因此本试
为0-20uL),超声波清洗器,离心机。
验选择C18柱。
1.2HPLC法测试条件
2.1.2检测波长的选择比较了245、254、260nm
HPLC法参考条件:色谱柱,C18柱(150mm
等几个不同波长的峰,结果表明:在254nm下测定
3.9mm);流动相,甲醇-冰階酸水溶液(冰醋酸水灵敏度和各个峰的吸收值均较高。因此,采用254
溶液体积分数为1.8%);检测器,紫外检测器;色谱mm作为检测波长。
柱温度,40℃;进样量,10uL。
2.1.3流动相的选择流动相的选择要在可以使
样品分离的基础上,选择能保护色谱柱,延长仪器寿
收稿日期:2009-10-14
命,价格经济,危害小的试剂。我们采用甲醇一冰醋
作者简介:孟橘(1967),女,高级工程师,主要从事油脂分酸水溶液作流动相,其原因为试剂价格便宜易得;选
析研究、标准制修订及产品研发工作。
择冰醋酸水溶液而不选用醋酸铵的原因是后者为盐
万方数据
2010年第35卷第3期
中国油脂
溶液,长期使用盐溶液容易引起仪器内部堵塞,如泵
表2不同人员比对结果
%
堵塞等,为了避免这类情况的发生,每次做完试验需
项目大豆甙染料木甙大豆甙元染料木素黄豆黄甙黄豆黄素
用大量的水冲洗系统,造成试验时间的延长,也影响
人员118.5429.031L.601.,t81.040.80
了仪器的寿命。
人员218.6129.471.521.161.070.81
2.1.4流速的选择试验表明,流动相流速较高平均18.5829.251.51.171.0%0.81
时,会缩短保留时间,影响染料木甙的分离,为了最D0050.310.060.020.g0.0
大限度地保证分离效果,分别对0.8、1.0、1.2、1.5
1.063.78
2.230.87
mL/min4个流速进行比较,结果发现流速过慢分离2.3回收率试验
完全,但保留时间较长,峰形较差,流速过快则不能
准确吸取一定量对照品标准储备液加入样品中
实现完全分离。为保证分离完全,又缩短保留时间,与样品一同处理后,进行HPC法分析,结果见表
确保峰形美观,流速定为1.0mL/omin,6种组分能在3。6种组分回收率的平均值分别为95.48%、
40min内完全分离,分离效果见图1。
95.15%、104.92%、104.04%、102.74%和103.13%。
1.大豆甙
而它们的相对标准偏差也较小,分别为0.98%
2.黄豆甙
3染料木武
0.02
1.04%、1.77%、1L.24%、1.62%和1.28%。
5大豆甙元
6.染料木
表3加标回收率试验
%
项日大豆甙染料木甙大豆甙元染料木素黄豆黄甙黄豆黄素
95.959%5,3102.70106.00100.0510.23
29.0699.55103.28104.30102.84104.67
1015202530354045
保留时间/min
96.519%.36107.00103.05103.99103.58
95.749.10106.20102.70102.55102.46
图1混标色谱图
595.16.70105.40104.14104.25103.69
2.2椅密度试验
平均95.4895.15104.9?104.04102.74103.13
在所选择的HPLC法测试条件下,对同一样品S0.9%0.91.1.29
进行7次重复性试验,结果见表1。由表1可以看SD0.8?,71.2L,21.28
出,大豆甙、染料木甙、大豆甙元、染料木素、黄豆黄
3结论
甙及黄豆黄素的相对标准偏差较小,分别为1.73%、
采用高效液相色谱法,在比较了现有大豆异黄
2.91%、4.03%、4.51%、3.94%和4.08%。
酮检测方法的基础上,建立了一套简便、快捷、高准
表1同一品测试结果
%
确度、高灵敏度并能长期用于日常大豆异黄测定
项目大豆甙染料木甙大豆甙元染料木素黄豆黄甙黄豆黄素
的方法
l18.0127.321.491.151.020.82
参考文献
218,828.871.671.281.140.78
[1]王哲,高效液相色谱法测定大豆异黄酮含量的研究[」
318.1228.591.591.161,030.88
中国油