SNT 1559-2010 非洲猪瘟检疫技术规范.pdf

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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/"1559--2010
代替SN/T159.1-2005、SN/T1559.
05、SN/T1559.
非洲猪瘟检疫技术规范
Protocol of quarantine for African swine fever
2010-03-02发布
2010-09-16实施
中华人民共和国
国质量嗌督检验疫点局
发布
SN/T1559-2010
前言
本标准代替SN/T1559.1-2005《洲猪瘟直接免疫荧光试验操作规程》、SN/T1559.2-2005《非
洲猪瘟间接免疫荧光试验操作规程》、S/T1559.32005《非洲猪瘟病红血球吸附试验操作规程
本标准的附录B为规范性附录,附录A、附录C、附录D和附录E为资料性附录。
本标准山国家认证认可监督管理委员会提出并H口。
本标准起草单位:中华人民共和国珠海出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、屮华人民共
和国深圳出入境檢验檢疫局。
本标准主要起草人:岁宗正、潘文波、林祥梅、曾少灵、薄清如、吴绍、徐海麦、杨素
本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准
SN/T1559-2010
非洲猪瘟检疫技术规范
范围
本标准规定了非洲猪瘟红细胞吸附试验、芡光抗体试验、聚仚酶链式反应和 Hagman探针荧光
PCR、海联免疫吸附试验、间接荧光抗体试验利免疫印迹试验的技术要求。
本标准适用于非洲猪瘟的检疫。
2规范性引用文件
下列文件中的条歇通过本标准的引用而成为本标准的条散。凡是注口期的引用文件,其随后所有
的修收单(不包括助误的内容)或修订版均不适用于本标准,歧励根据本标准达成协议的各方研究是否
可使用这些文件的最新版木。凡是不注日期的州用文件,其最新版本适于木标准。
GB19489实验室生物安全通用要求
缩略语
列咯语适用于本标准。
ASF:非洲猪癌
ASFV:非洲猪瘟病拣
IIAD:红细胞败附。
FAT:荧光抗体试验。
PCR:聚合酶炼反应。
ELISA:联免疫吸附试验。
IFAT:问接免疫光抗体试验
MEM:最低基培养基。
PBS:磷酸缓冲溶液。
3.10
EDTA:乙一.胺四乙酸。
CPE:细胞病变效应
dNTP:脱氧核糖一磷酸。
SN/T1559--2010
DNA:脱氧核糖核酸。
Ct:循环值。
3.15
FITC:异硫氰酸火光素
4初步诊断
参照附录A中的临床症状和病埋变化做出初步诊断,确诊还需实验室诊断。实验室诊断方法见第
章仝第11章。
病毒红细胞吸附试验(HAD)
5.1材料
5.1.10.9%氯化钠:配制方法见附录B。
5.1.20.01mol/LpH7.4PBS:配制方法见附录B
5.1.3青霉素、链荐素、庆大莓素和制寄菌素。使用前用上述PBS分別配成10000IU/nL、10mg/
mI、500IU/mI.和500IU/m[.的浴液。
5.1.4肝素:使用前用0.9%氯化钠配成10001U/ml
5.1.5细胞基础培养液:配制方法见附录B
5.1.61%猪红血胞:配制方法见附录B。
5.1.7非洲猪瘟标准毒株。试验环境和防护要求见GB19489,以下病毒操作的过程都按此要求。
5.1.8待检样品:包括肝素(或 EDTA)抗凝血和脾脏、扁桃体、肾脏、淋巴结等组织。被检样品在运输
过程中应尽可能的低温保存,但不能使样品冻结。样品到达实验邻之后,如果不是立刻用于诊断,应该
保存在一70℃冰箱。
5.2操作方法
5.2.1制备组织悬液
在放有灭菌砂子的研钵中用纽织研磨器或捣碎器将被檢纽织磨碎,川人5mL~10mL.含抗生素
的PBS(pII7.4),制成组织悬液(每宅爪组织.悬液的抗菌素含量为:青霉素10001U,链霉素1mg,庆大
霉素50IU和制霉菌素50IU)。将组织悬液1000g离心5min,収上清保存在4℃备用
2制备白细胞
采取健康猪血,用玻璃珠脱纤或用肝素抗凝(毎毫升猪血含肝素100IU),700g离心30min.将上
层血清或血浆吸出条用。吸取中问淡黄色白细胞层,加三倍体积的0.83%氯化铵溶液,混合后室温孵
育15min,650g离心15min,小心转移上清液,剩下的细胞沉淀细胞基础培养液或PBS洗涤3次,备
用
5.2.3制备细胞培养液
将上述血清或血浆加人细胞基础培养液内配制成细胞培养液,血清或血浆的终浓度为10%
30%,同时加入抗牛素。
5.2.4培养白细胞
将白细胞悬浮于细胞培养液中,使细胞含量为10°个/mL~10个/mL,分装丁160mm×16mm
的管中,每管1.5mIL,将试管与水平面呈5~10°倾斜放置,置于5%二.氧化碳环境中,37培养2d
4d。这?过程也可以在96孔培养板进行,每孔加入200LH细胞培养液(10°细胞/mL~10细