三氯乙酸沉淀蛋白法辅助提取牛奶中环腺苷酸工艺.pdf

第31卷第4期
食品科学技术学报
Vol, 31 No 4
2013年7月
Journal of Food Science and Technolog
Jul.2013
19
文章编号:20956002(2013)04-0019-04
引用格式:刘永峰,高俊岭,徐阳,等、三氯乙酸沉淀蛋白法镛助提取牛奶中环腺苷酸工艺食品科学技术学报,2013,31(4):
LIU Yong-feng, GA0 Jun-ling, XU Yang, el al. Trichloroacetic Acid Prolein Precipitation Assiste Exiraction of CAMP in
Milk. Journal of Food Science and Technology, 2013, 31(4): 19-22
三氯乙酸沉淀蛋白法辅助提取牛奶中环腺苷酸工艺
刘永峰,高俊岭,徐阳,冉仁森
陕西师范大学食品工程与营养科学学院,陕西西安710062)
摘要:以牛奶为原料,通过离心去除乳中脂肪,采用不同质量分数不同用量TCA沉淀乳中蛋白
质,再浓缩乳糖,分离提取环腺苷酸(cAMP),选用最住高效液相色谱条件测定牛奶中CAMP含量
结果表明,不同质量分数TCA处理组之间比较,质量分数为10%TCA处理组CAMP含量显著高于
其他2组(P<0.05);不同月量TCA处理銀之间比较,8mL相同质量分数TCA处理组CAMP含量
較其他2纽显著降低(P<0.05).选用TCA沉淀乳蛋白方法提取CAMP时最佳工艺是TCA质量分
数为10%,用量为4mL,cAMP质置浓度为(29.02士1.58)ug/ml.研究通过建立牛奶中cAMP的
提取エ艺,可从奶略副产物、乳清、不合格原料奶中提取cAMP,在降低cAMP提取成本、废物利用
増加牛奶附加值等方面具有重要意义
关键词:牛奶;环腺苷酸;三氟乙酸;高效液相色谱
中图分类号:TIS252.9
文献标志码:A
环腺苷酸( cyclie adenosine-3',5'- nontophospho-蛋白(略蛋白至少由10种不同蛋白质组成,是几种
pale,cAMP),溶于水,具有环状结构,性质稳定,对含磷蛋白质的复合体),乳清蛋白为18%-20%,乳
酸、碱、热都相当稳定,存在于多数生物体内,调节着中主要的乳清蛋白有B-乳球蛋白、-乳球蛋白、血
生物体内的物质代谢,对细胞代谢及多种生理效应清白蛋白、免疫球蛋白和际、胨;剩余的为一些含氮
具有关键作用2.医学研究已经也证明至少有40化合物,属于非蛋白氮(如氨、游离氨基酸、尿素、尿
多种重大疾病与cAMP的代谢有关,人体内缺乏酸、肌酸、嘌呤碱等及少量含氮维生素中的维生素态
cAMP会导致恶性肿瘤、癌症、失眠健忘、贫血、心血氮)”.通过标准罗兰分离法测定,牛乳中氮分布为
管疾病等众多疾病的发生目前,对于食品及食76%的酪蛋白、18%乳清蛋白和5%左右的非蛋白
品原料中cAMP的研究,仪在枣中取得了一定的进氮8.在生物化学、食品科学及其他研究领域中,人
展.张明娟等用HPLC法测定了8种枣果中们经常用到蛋白或多肽的沉淀剂,其中三氯乙酸
eAMP的含量,其最高含量为375.61pg/g,最低为( trichloroacetic acid,TCA)应用最为广泛”.TCA
46.01g/8;张岩等用HPLC测定浓缩枣汁中对蛋白的沉淀主要归功于3个氯原子的独特作
cAMP含量为4.556mg/L.马志科等°报道了从鲜用",TCA作为蛋白质变性剂,使蛋白质构象发生
羊奶中提取cAMP的方法,并利用放射免疫方法测改变,暴露出较多的疏水基团,使之聚集沉淀
定了cAMP含量,但有关牛奶中的cAMP研究尚末因此,本实验借鉴前人在枣、羊奶上的提取和测定方
见有相关报道.
法,首次采用TC.A沉淀蛋白法对牛奶中的cAMP进
牛奶中的蛋白质主要由酪蛋白和乳清蛋白组行分离提取,通过HPLC测定牛奶中cAMP含量,建
成,蛋白质含量为3.0%~3.7%,其中约80%为酪立一种牛奶中cAMP分离提取方法
收稿日期:2013-07-0
基金项目:陕西省科技攻关项日(2012NY2-17);西安市科技计划项目(NC1208-2)
作者简介;刘水峰,男,副教授,博土,主要从事食品生物技术及营养学方面的研究
万方数据
食品科学技术学报
2013年7月
中双蒸水中磷酸二氢钾的浓度为0.05moL/l.检测波
1材料与方法
长为259m,色谱柱为HC-CI8柱,流速1.0mL/min,
检测温度为室温,进样量为20;采用保留时间法
1,1材料与仪器
定性3,出峰时间为3.4min
1.1.1原料与试剂
1.2.5样品中cAMP含量的测定及统计分析
新鲜牛乳,购于陕西省西安市郊农户家中,于
实验共设置3个TCA质量分数水平和3个
4℃条件下冷藏保存,至实验使用
TCA用量水平,共9个处理,每个处理3次重复.每
cAMP标准品,色谱纯,德国 Sigma公司;甲醇,个样品溶液分别过0.45m滤膜,进样进行 HIPLC
色谱纯,加拿大 Promptar公司;三氯乙酸、磺基水杨测定
酸、乙醇、磷酸二氢钾均为分析纯
根据式(1),计算出每个样品中CAMP的质量
高效液相色谱仪,美国 Waters公司;色谱柱,∥C浓度
1.1.2仪器
P( CAMP
C18(5um,4.6mmx250mm),美国 Agilent公司
式(1)中为制备样品溶液浓缩后的体积,mL
TU-2000型紫外可见分光光度计,日本日立公
c为HPLC测定样品溶液中eAMP质量浓度,g/mL
RE-52A型旋转蒸发仪,上海亚荣生化仪器厂;D5为制备样品溶液所用牛奶的体积ml
RZ型离心机型,湖南湘仪集团.
每个样品中cAMP质量浓度在不同处理下分别
1.2实验方法
计算,所有数据采用SPSs18.0软件进行单因素9水
1.2.1样品去乳脂
平方差分析,并进行多重比较
将300mL鲜乳使用医用纱布过滤,分装至20
个离心管,预热至35~40℃,然后5000r/min,离心2结果与分析
10min,取下层去脂后的牛奶,混合
1.2,2样品去乳蛋白
2.1样品中eAMP的色谱图
将去脂后的牛奶,装在27个15mL离心管中
样品cAMP的色谱图与标准品色谱图分别为图
每管10mL.分别用质量分数为10%,15%,20%的
和图2.图1表明,样品中cAMP保留时同为
CA溶液处理,每个离心管中分别加不同质量分数3.374min,而图2中标准品的保留时问为3.389min,所
TCA4,6,8mL,35℃沉淀l0min后,100 r/min,离有样品中cAMP保留时间均与cAMP标准品的保留
心10min,取上清液1滴,放人黑色比色板孔中,加
时间一致,并且样品中的目标峰与其他峰分离效果
滴质量分数为20%磺基水杨酸检测,如出现白色沉都较好·推测其他峰有可能是环鸟苷酸、明胶等
淀,证明还有蛋白质存在,继续沉淀、离心,直到无白物质
色沉淀为止,过滤,取无色上清液分别至27个离心
AMP-3.374
管中
70
1.2.3样品去乳糖
将27个离心管中去蛋白后的滤液的分别置于
旋转蒸发仪中,75℃浓缩,将提取液浓缩到