水杨酸浓硫酸比色法测定浒苔中硝酸盐含量.pdf

第39卷第2期
海洋学报
Vol 39, No.2
2017年2月
Haiyang Xuebao
February 2017
赵倩,石晓勇,陈月红,等.水杨酸浓硫酸比色法测定浒苔中硝酸盐含量[J].海洋学报,2017,39(2):112-119,doi:10.3969/j.
issn,0253-4193.2017.02.011
Zhao Qian, Shi Xiaoyong. Chen Yuehong, et al. Salicylic acid-coneentrated sulfuric acid colorimetry method for determination of nitrate
content in Uiwa prolifera [J]. Haiyang Xuebao, 2017, 39(2): 112-119, doi: 10.3969/j. issn0253-41932017 02. 011
水杨酸浓硫酸比色法测定浒苔中硝酸盐含量
赵倩2,石晓勇1…23,陈月红2,王丽莎2,唐洪杰2
(1.中国海洋大学化学化工学院,山东青岛266100;2.中国海洋大学海洋化学理论与工程技术教育部重点实验室,
山东青岛266100;国家海洋局海洋减灾中心,北京100194)
摘要:洴苔是我国绿潮的主要肇事物种,测定其体肉硝酸盐含量对研究浒苔对硝酸盐的同化和吸收
有着重要意义。本文采用水杨酸浓疏酸比色法对浒苔体内硝酸盐含量进行了测定,并对该方法中样
品预处理、显色剂使用量及工作曲线选择等步骤进行了相应的探讨及优化,使其更用于测定浒苔体
内的硝酸盐含量,同时确定了该方法的检出限、精确和准确度。研究结果表明本文所确定的方法适
用千浒苔样品中硝酸盐含量的快速测定。
关键词:浒苔;水杨酸浓硫醱比色;硝酸盐
中图分类号:(Q945
文献标志码:A
文章编号:02534193(2017)02-011208
1引言
法、毛细管电泳法和酚二磺酸法門等。其中光
谱法和色谱法都需将硝酸根离子经铜柱还原成亚硝
自2007年以来,黄海海域每年都会暴发大规模酸根离子间接测定,前处理操作繁琐,而应用较为广
绿潮灾害,主要肇事物种为浒苔( Ulva prolif-泛的酚二磺酸法操作条件要求严格,耗时较长,不适
浒苔绿潮暴发会改变生态系统的结构
宜大批量样品的检测。相比于上述其他方法,水杨酸
降低生物多样性,对海洋生态环境造成极大危害。浓硫酸比色法具有不需要复杂的前处理过程、准确性
氮作为浮游植物生命活动中不可缺少的营养元素,其高等优点,适用于怏速测定植物体内硝酸盐含量,在
代谢也是浮游植物营养代谢的重要部分「-1,对海洋测定荒菜体内硝酸盐的含量方面得到了一定的应
植物生长繁殖有重要影响。而海水中的氮主要以用。该方法的原理是基于硝酸根与水杨酸在浓硫
NO2-N形态存在,浮游植物的生长与其对硝酸盐的酸的作用下所生成的硝基水杨酸在碱性环境中会呈
同化和吸收能力密切相关。因此,测定浒苔体内硝酸现黄色,并且一定浓度范围内,颜色深浅与硝酸盐含
盐的含量有利于浒苔对硝酸盐同化过程的研究,可以量成正比2。因此,通过测定此黄色溶液在其最适
为浒苔暴发防治措施的建立提供一定的理论依据
波长(410mm)下的吸光度,即可计算得到相应的硝酸
目前,检测植物体内硝酸盐浓度的方法主要有高盐浓度。目前,已有研究者1将该方法应用于浒苔
效液相层析法?、离子色谱法-1、液相色谱体内硝酸盐含量的测定,但在测定过程中,某些实验
法2、分光光度测定法-、极谱法?、电位测定条件的改变会直接影响到测定结果,为此,本文对该
收稿日期:2016-08-30;修订日期
基金项目:黄渤海海洋动力环境和生态调查〈2012FY112200)
作者简介:赵倩(1990),女,山东省莱西市人,从事海洋生态污染作态化学的研究。 E-mail: zhian807@163,cm
x通信作者:唐洪杰,女,副教授,主要研究海洋生态污染及生态化学。E-mail:thjie@ouc.edu.cn
万方数据
2期赵情等:水杨酸浓硫酸比色法测定浒苔中硝酸盐含量
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方法的测定条件进行了优化,以确保其测定浒苔体内2.5.1显色剂一5%水杨酸浓硫酸体积的影响
硝酸盐含量时的准确性和稳定性。
按2.4节中的方法,取一定量上清液,加入5%水
2材料与方法
杨酸浓硫酸溶液,设定其体积范围为0.2~0.5mL,考
察显色剂体积对硝酸盐含量测定的影响,以期获得显
2.1主要仪器
色剂的最佳用量,每个显色剂体积设3组平行实验
UV2550紫外一可见分光光度计、分析天平、恒2.5.2,作曲线的选择
温水浴锅、移液枪等。
在采用水杨酸浓硫酸比色法测定浒苔体内硝酸
2.2所用试剂
盐含量时,样品的预处理过程可能会对硝酸盐产生吸
100mg/L硝酸盐标准溶液;4%醋酸锌溶液;8%附,从而对结果的准度产生影响。因此,本文分别
氢氧化钠溶液;5%水杨酸浓硫酸(所用试剂均为优级采用未经过及经过2.4节中所述处理过程的硝酸盐
纯)。
标准溶液来绘制标准曲线和工作曲线,以确定样品的
2.3实验材料及培养
预处理方法是否会对样品硝酸盐含量的测定产生影
本实验选取黄海绿潮暴发区常见的绿潮肇事藻响。同时选取5.0835mg/L、20.140mg/1、25.175
种浒苔( Ulva prolifera)为研究对象。藻体取自苏北mg/L的硝酸盐溶液,按照2.4处理方法进行处理,测
紫菜养殖筏架区,现场用天然海水反复冲洗干净,带定其浓度,计算硝酸盐的回收率。
回陆地实验室培养,挑选録色健康藻体,在质量分数
2.5.3检出限及准确度、精密度的确定
0.2%的KI溶液中浸泡1min21,用过滤灭菌的天然2.5.3.1NO测定的检出限
海水反复冲洗,暂养于温度为(15±1)℃、光照强度
取空白样(即0.4mL去离」水)按2.5.2小节中
283 umol photons/(m2?s)、光照周期12L:12D)的
确定的工作曲线测定方法进行处理,测定样品的
A41o,每组设20个平行样,设置3组,确定其检出限。
称取约3mg新鲜浒苔样品于组织研磨器,加人マ令÷3?9
光照培养箱中。NaNO)和KH2PO作为唯一的外加
测定方法的准确度及精密度
氮源和磷源,浓度分别为80pmol/L和5amol/L,其
取浓度为2.014mg/L、10.070mg/L和25.175
余营养液等同于/2配方,接种指数生长期的浒苔于
mg/L的NO溶液依照同样方法测定溶液的A1o,每
上述培养基。实验所用海水为天然海水,经GF/F膜
个浓度设立16个平行样,确定该测定方法的精密度
过滤后,蒸汽火菌备用。
2.4样品预处理及测定
4浒苔中硝酸盐的提取效率
浒苔经预处理后经离心分离得到上清液和残渣
1mi4%醋酸锌溶液将浒苔充分研磨,并用1mL去将残渣以去离子水进行洗涤、震荡后离心取其上清
离子水冲洗组织研磨器,将研席液转移至加有5m活液。分别测定两份上清液中硝酸盐含量,拟检验残渣
性炭粉末的离心管中。然后将离心管置于70C恒温水中是否有硝酸盐残留。共设置10组平行样。
浴中加热30min,待冷却至室温,离心力为3800g2.5.5浒苔体内硝酸盐测定方法准确性验证
的条件下离心10min后,取上清液用