植物油DNA的高效提取方法.pdf

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技
工艺技术
植物油DNA的高效提取方法
刘锦鹤沈阳食品检验所
摘要:本文优化高效提取植物油中DNA的方法,以市场上日常可米购的食用植物油为实验原籵,并利用多种检测方
法评价优化的硅膜吸附柱法提取效率。结果显示,经过优化后的提取方法具有可靠的提取质量,提取效率高,便于后续植
物油基因检测工作的良好开展。
关键词:植物油;DNA;提取方法
近年来,食品安全词题越来越得过程中,使用的试剂主要包含CTAB缓待测样品均具有清晰的目的基因条带,
到社会各界的关注与重视,尤其是人们冲液、MgS04、TE缓冲液、70%乙醇和其中出现两种内源基因条带的有4种植
每天接触的食用植物油。近年来,转基 Taqman DNA聚合酶等:利用离心柱、物油,分別为天然谷物调和油、两个品
因原料滥用、原料掺假、地沟油违法使水浴锅、电泳设备等实验仪器开展。牌的食用调和油、深海鱼油调和油,扩
用等方面的问题频发,在鉴定检测中
将1mL食用植物油、400LTE増条带分别为内源基因 Lectin、HGI/
就逐渐突显出分子生物学检测的重要作缓冲液共同加入1.5mL离心管中,Y;2外源基因CaM35S启动子、MOS终
用。检测食用植物油的DNA时,首要工经5min颠倒混匀后,室温下12000止子、 EPSPS等外源基因的检测,食用
作是将其中的DNA提取出来。然而,由r/min离心1min。上层油脂层去除植物油DA经吸附柱富集提取之后
于食用植物油生产加工过程中采用的工后,再次将1mL食用植物油加入离次进行外源基因PCR扩增,以扩増条带
艺使其中的核酸发了生严重降解,DNA心管中,离心,上层油脂层去除,此为依据,对植物油检测结果做出定性判
含量极低,再加上混杂多种其他成分,过程共重复20次,富集待测样品中的断,观察其中是否含有转基因成分。
更增加了DA提取的难度。尽管国内外DNA。DMA提取采用水相,CTAB缓冲液增产物的凝胶电泳结果显示,目的基因
提出了众多提取食用植物油DA的方400ルL加入其中,进行1~3s振荡条带在转基因大豆、天然谷物调和油
法,但大多操作繁琐、提取效率低、提取,30min温育,温度65℃,之两个品脚的一级大豆油、两个品牌的食
无法实现通用。所以,积极构建能够后将500pL异丙醇、2ル9鲑鱼精子用调和油、深海鱼油调和油和转基因菜
避兔这些问题的高效提取方法,在实DNA均加入,混匀后放当2h,温度-20将油样品中均出现,说明转基因成分包
际检测过程中是急需解决的词题。
℃。于硅膜吸附柱中加入上述所有溶含在这7种产品中。
1植物油DA高效提取方法术液,离心1min,速度8000rmin,收
本研究采取硅膜吸附柱富集处理
近年来,掺假植物油、转基因作集管中废液去除,500L70%乙醇(事提取食物植物油的DNA,通过利用核酸
物制成的植物油较多出现在消费市场先经4℃预冷)加入吸附柱中,再离在水相中的溶解度远大于有机相的原
中。植物油掺假不仅会影响消费者的心1min,速度12000r/min,收集管理,有效提高裂解液中萃取到的核酸。
身体健康,而且也会严重损害及侵犯中废液去除,重复洗涤1次。液体挥干并利用普通PCR法、恒温LAMP法与实
消费者的利益及权利。2015年,颁布在室温下进行,或放置在核酸真空干燥时荧光PCR法检测提取的植物油产品
实施的《食品安全法》更加要求所有系统中进行。吸附柱去除,于干净离心DNA,无论是各种作物的內源基因,或
以转基因产品为原料生产加工的食品管中放置,30LTE缓冲液(事先预是转基因作物的外源基因,均能获得
必须在包装上有明确的标识山。基于热,温度65~70℃)加入吸附膜中间,清晰的目的基因条带2。但是增加富
此种现状,本文以非转基因大豆、转溶解DNA,保存条件为4℃。
集处理步骤,大大延长了提取时间。
基因大豆、市售食用植物油为研究材1.2检测DNA提取结果
因此,在后续的工作中还需要进一步
米料,分析硅膜吸附柱法对提高植物油
采取普通PCR法、恒温LAMP法、研究调整,以期在不影响提取结果的
DNA的提取效果的可行性。
实时荧光PCR法分别检测提取的DA,前提下,尽量减少富集处理次数。
本文使用的非转基因大豆、转基各检测方法在检测过程中严格按照操3结语
因大豆均来源于农科院;食用植物油作步骤进行,并观察对比检测结果。
本研究实验结果?示,硅膜吸附
购买于超市中,共涉及5个品牌1和2硅膜吸附柱法提取植物油柱对提取植物油卟A的提取效率及可
产品,其中分别为深海鱼油调和油(转DNA结果评价
靠性均比较好,样品转基因检测结果
基因)、谷维多稻米油、食用调和油(转
利用普通PCR法、恒温LAMP法、与食用油的转基因标识一致,可以在
基因)、菜将油(转基因与非转基因2实时荧光PCR法检测其提取结果时,转基因成分分析中广泛应用。
种)、天然谷物调和油(转基因)、分为两个方面:①内源基因的PCR扩参考文献
级大豆油(转基因)、压窄玉米油増,食用植物油DNA经吸附柱法富集
王鸣秋,刘艳,杨硕,等,几
(非转基因)、一级大豆油(转基因)、提取之后,二次进行内源基因PCR扩种食用植物油DNA提取方法效果比较
食用调和油(转基因)和有机压榨大増,内源基因包含大豆内源 Lectin、U.食品安全导刑,2017(9):154-15
豆油(非转基因)
玉米内源Adh、水稻内源SPS、油菜内
[]齐玲倩,刘秀,丁梦璇,等.植
1.1提取方法
源HGIM,检测DNA的提取效果。扩物油DNA提取和基因检测研究进展[]
利用硅膜吸附柱法提取植物油DA增产物的凝胶电泳分离条带结果显示,食品研究与开发,2016(1):220-224.
98食品安全导刊2017年9月
万方数据