GB 13087-1991 饲料中异硫氰酸酯的测定方法.pdf

中华人民共和国国家标准
饲科中异硫氯酸酯的测定方法
GB13087-91
Method for determination of isothiocyanates
主题内容与适用范?
本标准规定了配合恫料和菜将饼粕中异硫氰酸酯的测定方法
本标准适用于配合饲料(包括混合饲料)和菜籽取油后的饼粕中异硫氰酸酯的测定
第一篇气相色谱法
2原理
配合饲料中存在的碗葡萄糖苷,在芥子酶作用下生成相应的异硫氰酸酯,用二氯甲烷提取后再用气
相色谱进行测定。
3试剂和溶液
除特殊规定外,夲标准所用试剂均为分析纯,水为蒸馏水或相应纯度的水。
3.1二氯甲烷或氯仿(GB682)
3.2丙酮(GB686)。
3.3pH7缓冲液:市售或按下法配制。量取35.3mlL0.1mol/L柠檬酸(C4HO1H2O)溶液,置入200mL
定容瓶中,用0.2mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO)·12H-O,GB1263)稀释至刻度,配制后检査pHI值。
3.4无水硫酸钠。
3.5晦制剂:将白芥( Sina pis alba L.)种子(72h内发芽率必须大于85%,保存期不超过两年)粉碎
后,称取100g,用300mL丙酮(3-2)分10次脱脂,滤纸过滤,真空干燥脱脂白芥子粉,然后用400mL水
分两次提取脱脂粉中的芥子酶,离心,取上层混悬液体,合并,于合并混悬液中加入400mL丙酮(3.2)沉
淀芥子酶,弃去上清液,用丙酮(3.-2)洗沉淀5次,离心,真空干燥下层沉淀物,研磨成粉状,装入密闭容器
中,低温保存备用,此制剂应不含异硫氧酸酯。
3.6丁基异硫氰酸酯内标溶液:配制0.100mg/mL丁基异硫氰酸酯【CH3(CH2)2NCS〕二氯甲烷或氯
仿(3-1)溶液,贮于4C,如试样中异硫氰酸酯含量较低,可将上述溶液稀释,使内标丁基异硫氰酸酯峰面
积和试祥中异硫氰酸酯峰面积相接近
仪器、设备
4.1气相色谱仪:具有氢焰检涸器。
4.2氮气钢瓶:其中氨气纯度为99.99%。
4.3微量注射器:5l。
4.4分析天平:感量0.0001g。
国家技术监督局1991-07-16批准
1992-04-01实施
GB1308791
4.5实验室用样品粉碎机。
4.6振荡器(往复,200次/min
4.7具塞锥形瓶,25mL。
4.8离心机。
4.9离心试管:10mL。
试样制各
采集具有代表性的配合恫料样品,至少2kg,四分法缩分至约250g,磨碎,过1mm孔筛,混匀,装入
密罚容器,防止试样变质,低温保存备用。
6測定步
6.1试样的酶解
称取约2.2g试样于具塞锥形瓶(4.7)中,精确到0.001g,加入5mLpH7缓冲液(3.3),30mg海制
剂(3,5),10mL丁基异硫氰酸酯内标溶液(3.6),用振荡器(4.6)振荡2h,将具塞锥形瓶(4.7)中内容物
转入离心试管(4.9)中,离心机(4.8)离心,用滴管吸取少量离心试管(4.9)下层有机相溶液,通过铺有少
量无水硫酸钠(34)层和脱脂棉的漏斗过滤,得澄清滤液备用
6.2色谱条件
6.2.1色谱柱:玻璃,内径3mm,长2m。
6.2.2固定液:20%FFAP(或其他效果相同的固定液)。
6.2.3载体: Chromosorb W,HP,80~100目(或其他效果相同的載体)。
6.2.4柱温:100℃。
6.2.5进样口及检测器温度:150℃。
6.2.6載气(氮气)流速:6mL/min。
6.3测定
用微量注射器(4.3)吸取1~2pL上述澄清滤液,注入色谱仪,测量各异碗氰酸酯峰面积。
7测定结果
7.1计算公式
X=n5.19xs.x(4/3×9.15×S,)+(4/4×118
(4/5×127.21XS)×1000
S.×m(1.15S+0.98S+0.88S,)X1000
………(1)
式中:X一试样中异硫氰酸酯的含量,mg/kg;
m试样质量,g
m。--10mL.丁基异硫氧酸酯内标溶液中丁棊异硫氰酸酯的质量,mg
S-一丁基异硫氯酸酯的峰面积;
S.丙烯基异硫氰酸酯的峰面积;
丁烯基异硫氰酸酯的峰面积;
S,一一戊烯基异硫氰酸酯的峰面枳
7.2结果表示
每个试样取2个平行样进行测定,以其算术平均值为结果。结果表示到1mg/kg
GB13087~91
7.3重复性
同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定,所得结果之间的差值;
在异硫氰酸酯含量小于或等于100mg/kg时,不超过平均值的15%
在异硫氰酸酯含蜇大于100mg/kg时,不超过平均值的10%。
第二篇银量法
8原理
菜籽饼粕中存在的硫葡萄糖苷,在芥子酶作用下可生成相应的异硫氰酸酯。用水气蒸出后再用硝酸
银氢氧化铵溶液吸收而生成相应的生硫豚。过量的硝酸银在酸性条件下以硫酸铁铵为指示剂用硫氯
酸铵砢滴,再计算出异硫氰酸酯的含量。
9试剂和溶液
除特殊规定外,本标准所用试剂均为分析纯,水为蒸馏水或相应纯度的水。
9.1乙醇(GB679):95%(V/V)。
9.2去泡剂:正辛醇(CH1,OH)。
9.36mol/L硝酸溶液:量取195mL浓硝酸(GB626),加水稀释至500mL
9.410%氢氧化铵溶液:取氨水(30%,GB631)100mL,加200mL水混匀。
9.5硫酸铁铵溶液:称取100g硫酸铁铵【NH4Fe(SO)212H2O,GB1279),溶于500mL水中。
9.60.1mol/L硝酸银标准溶液:准确称取在碗酸于燥器中干燥至恒重的基准硝酸银16,987g,用水
溶解后加水定容至1000mL。置棕色瓶中避光保存。
9.70.1mol/L碗氰酸铵标礁贮备液:称取76g硫氰酸铵( NHCNS,GB660),溶于1000mL.水中。
按下法标定:准确量取10.00m[-0.1mol/L硝酸银标准溶液(9.6),加1mL碗酸铁铵(9.5)指示剂和2.5
mL6mol/L硝酸(9.3),摇动下用0.1mol/L硫氰酸铵标准贮备液滴定,终点前摇动溶液至完全清亮
后,继续滴定至溶液所呈淡棕色保持30$。
硫氰酸铵标准贮备液的摩尔浓度按式(2)计算:
式中:N一硫氯酸铵标准贮备液摩尔浓度,mol/L;
硝酸银标准溶液摩尔浓度,mol/
V1ー硝酸银标准溶液的用量
消耗硫氰酸标准贮备液的体积
9.80.01mol/L硫氰酸铵标准工作液:临用前将0.1mol/L碗氰酸铵标准贮备液(9.7)用水稀释10
倍,摇匀。
9.9pH4缓冲液:称取42g柠檬酸(C。H2O,?H2O),溶于1L水中,用浓氢氧化钠溶液调节pH至4。
9.10粗酶制剂:取白芥( Sina pis alba L.)种子(72h内发芽率必须大于85%,保存期不得超过两年),
粉碎后用冷石油(沸程40~60℃)或正己烷脱脂,使脂肪含量不大于2%,然后再粉碎一次使全部通过
0.28mm筛,放4℃冰箱可使用6周。
10仪器、设备
10.1分析天平:感量0.0001g。
1.2恒温箱:温度范围30~60℃,精度土1℃;