豆壳中过氧化物酶的提纯.pdf

食品研究与开发
2010年8月
生物工程
第31卷第8期
159.
豆壳中过氧化物酶的提纯
王志兵,解丛林,张凤清,邱芳萍
(长春工业大学化学与生命科学学院,吉林长春130012)
摘要:建立一种从农作物废弃物一一大豆豆壳中提纯过氧化物酶的方法,并检测其纯度和分子量。以大豆豆壳为原
耕,以酶活力和酶比活力为考察指标,经过粉碎,超声波提取,硫酸绥分级沉淀,透析,DEAE- -Sepharose Flast Flow高子
交换层析和 Sephadex G-100凝胶柱层析等工艺过程,提纯豆壳过氧化物酶( soybean shell peroxidase,P),并通过
SDS-PAGE电泳检测其纯度和分子量。提取酶原液的最佳エ艺条件为:温度3℃,pH值52,液料比20gmL;硫酸
分级沉淀浓度为50%-90%时,含蛋白质较多,酶活性最高;经过提纯后的豆壳过氧化物酶经SDS-PACE电泳显示其
分子量约为3.5x0u-4.5x1)u范固内,Rz值为2.4。
关键词:?売;过氧化物酶;提取;纯化
Extraction and Purification of Peroxidase from Soybean Shell
WANG Zhi-bing, XIE Cong-lin, ZHANG Feng-qing, QIU Fang-ping
(School of Chemistry and Life Science of Changchun University of Technology, Changchun 130012, Jilin, China)
Abstract To set up a effective urification method of so bean shell peroxidase from rp waste, and to etec
its purity and molecular weight. Soybean shell peroxidase was extracted and purified by means of crushing
ultrasonic extraction, ammonium sulphate fractionated precipi ation, dialysis, Deae-sepharose Flast Flow
ion-exchange chromatography and Sephadex G-100 Gel column chromatography, using the enzyme activity and
specitic enzyme activity as detective markers. And its purity and molecular weight was tested through SDS
PAGE. The optimum technological conditions of extraction for SSP were: Temperature at 35C, PH 5.2, ratio of
liquid to solid at 20; when the concentration of ammonium sulphate were 50%-90 protein content and
enzyme activity were more high relatively; the molecular weight of purified SSP was 3.5x10u-45x10u, the
te of Rz was 2.4
Key words soybean shell; peroxidase; extraction; purification
过氧化物酶( soybean shell peroxidase,SsP)是ー合成以及木素降解等方面有着广泛的应用前景四。
类重要的氧化还原酶,广泛存在于各种植物、动物和
随着我国大豆工业的不断发展以及大豆产量和
微生物体内。具有多种不同的生物学功能,可以催化加工能力的不断提高,作为农作物废奔物的豆壳也会
过氧化氢氧化一系列的有机底物叫。各种植物中或多随之升高。如何进行豆壳的综合利用与开发,生产出
或少都存在过氧化物酶,但各种过氧化物酶的性质不高附加值的产品,将会越来越受到人们的关注。本文
尽相同。从农作物废弃物一一大豆豆売中分离得到的主要报道了豆売过氧化物酶的提纯工艺。
种新型的过氧化物酶,具有来源容易、含量丰富、底
物作用范围宽、耐热等优点,其在污水处理、食品添加
材料
剂、诊断试剂、工业“三废”的处理、各类高分子材料的1.1材料与试剂
干豆壳(种号:1086):收集于吉林省辽源市大豆
种植示范区;DEAE- Sepharose Flast Flow离子交换层
基金项目:长春工业大学科学研究发展基金(2008A15)
作者简介:王志兵(1982-)男(汉),助教,硬土,主要从事功能食品析:购于 Amersham公司; Sephadex G-100和透析袋
与生物技术研究。
购于北京鼎国生物技术公司;标准分子量蛋白: Sigma
靠通信作者
公司;其它试剂均为国产分析纯。
万方数据