金属离子对4-氨基安替比林与牛血清白蛋白相互作用的影响.pdf

2016年1月
化学研究
第27卷第1期
CHEMICAL RESEARCH
http://hxya.cbpt.cnki.net
金属离子对4-氨基安替比林与牛血清自蛋白相互作用的影响
高宗华“,付彩霞,王雪,张怀斌
(滨州医学院药学院,山东烟台264003)
摘要:采用荧光法研究了金属离子Cat、Zn+和Mg2+存在下4-氨基安替比林(4-AAP)与牛血清白蛋白
(BSA)的相互作用.结果表明,金属离子存在时,4AAP对BSA的猝灭常数减小,但猝灭机制仍旧为静态猝灭,
4-AAP与BSA之间的结合常数(KA)及结合位点数(n)均增大,分析认为,金属离子在二者的结合作用中起了
“离子架桥”的作用.
关键词:4-氨基安替比林;牛血清白蛋白;相互作用;金属离子
中阳分类号:O657.3
文献标志码:A
文章编号:1008-1011(2016)01-0051-03
The effect of metal ions on the interaction between 4-aminoantipyrine
and bovine serum albumin
GAO Zonghua, FU Caixia, WANG Xue, ZHANG Huaibin
( Pharmaceutical College, Binzhow Medical University, Yantai 264003, Shandong, China)
Abstract: The interaction between bovine serum albumin(BSA) and 4-aminoantipyrine (4
AAP) was investigated using fluorescence spectroscopy in the presence of metal ions (Ca2+
Zn'tand Mg) The results suggested that the quenching constant decreased in the presence
of metal ions, but the quenching mechanism was not changed. The binding constants(Ka)and
numbers of binding site(n) increased. The anslysis indicated that the effect of metal ions on
the interaction between 4-AAP and BSA was related to the metal ions function as the bridge
ons
Keywords: 4-aminoantipyrine; bovine serum albumin; interaction; metal ions
4-AAP作为原料中间体,被用于生产镇痛、消究提供一定的参考信息
炎、抗菌类的新型药物.血清白蛋白是生物体内
血浆中含量最丰富的蛋白质,对生命活动有着非常
实验部分
重要的作用,是运输内源及外源性物质的重要载1.1仪器与试剂
体.动物体的正常生理活动需要大量金属离子的
LS-55荧光分光光度计(美国,PE公司),TU-
参与,我们在前期的研究中发现金属离子对药物小1901双光東紫外-可见分光光度计(北京普析仪器
分子和蛋白质的作用会产生不同的影响-.鉴于公司),电热恒温水浴锅(龙口市先科仪器公司),
此,本文作者在模拟生理条件下,用荧光光谱法研究BP21D电子分析天平(上海精密仪器厂).BSA(生
了钙、镁、锌3种金属离子对4-AAP与BSA相互作化试剂,纯度>98%),4-AAP购自国药集团,为分
用的影响,以期为4-AAP在体内的转运、代谢等研析纯,氯化钠、Tris试剂、盐酸、氯化锌、氯化钙、氯
化镁均为分析纯.用0.05mol?IlpH=7.40的
Tris-HCl缓冲溶液(含0.1mol?I1NaCl)配制
收稿日期:2015-08-15
甚金项目:山东省教育厅科技计划项目(J08LG15)
BSA溶液,BSA浓度为1.0×10-6mol?L,用蒸
作者简介:高宗华(1966-),女,教授,研究方向为有机合成和光谱分馏水配制浓度为1.16×10-mol?L的4-AAP储
析.“通讯联系人,E-mail;gzh3308c163.com.
DOI:10.14002/j.hxya.2016.01.0071化学研究,2016,27(1):51-53
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化学研究
016年
备液;配制浓度分别为1.00X10-4mol?L1的灭的 Stern- Volmer曲线,如图2所示,求出292K
ZnCl2、MgCl2、CaC2溶液.实验用水为二次蒸馏水.时猝灭常数Ksy=4.75×10L?moll和猝灭速率
1.2荧光光谱定方法
常数K。=4.75×102L?mol1?s-1
292K时,移取3.0 ML BSA溶液于石英比色
K。值远大于各类猝灭剂对生物大分子的最大
皿中,逐次加入10uL的4-AAP溶液,摇匀,静置扩散碰撞猝灭常数2.0×101°L?mol1?s-u,由
5min.设定激发波长为280nm,测定体系的荧光光此推断4-AAP对BSA的荧光猝灭作用主要是静态
谱,记录最大发射波长处的荧光强度
猝灭
分别移取1.5mL的BSA和1,5mL的各种金
属离子(混合后BSA的浓度为5.00×10-7mol?
L;各种金属离子的浓度为5.00×10-mol
292K
L1)加入石英比色皿中,摇匀,静置5min,然后逐
2.5
次加入10uL的4AAP溶液,摇匀,静置5min,测
定混合体系的荧光光谱,考査金属离子对4-AP与
BSA结合作用的影响.
2结果与讨论
2.14-AAP对BSA荧光光谱的影响
c/10-3mol1
蛋白质结构中因含有色氨酸、酪氨酸和苯丙氨
图24-AAP对BSA的 Stern- Volmer曲线
酸残基而具有内源荧光.通过荧光光谱的变化可以
Fig 2 Stern-volmer curves for 4-AAP-BSA
反映小分子、金属离子等物质与蛋白质相互作用的
情况.图1为在292K时,4-AP对BSA荧光光2.24-AAP与BSA的结合作用
谱的影响.BSA的最大发射峰位于348.5nm附近
在静态猝灭中,小分子与蛋白质的结合作用可
处.随着4-AAP浓度的增大BSA的荧光发射峰强
以用公式g(Fo/F-1)=gKA+ nlgi]加以描
度明显减弱,发生荧光猝灭;最大发射峰位蓝移到
述,式中KA为4-AAP与白蛋白分子的结合常
346.5nm处,蓝移2nm.表明4-AAP与BSA发生
数,n为结合位点数.在292K时,以lg(Fo/F-1)
了相互作用,4-AAP的加入有可能改变了氨基酸残
对gLc]作图(图3).由直线的斜率及截距分别求得
基周围的微环境]
反应的结合常数KA及结合位点数n,见表1
600
500
0.4
400
台300
0.0
?200
100
-0.4
-0.6
350
450
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