SNT 2099-2008 进出口食品中绿脓杆菌检测方法.pdf

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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/TI2099--2008
进出口食品中绿胺杄菌检测方法
Determination of Pseudomonas aeruginosa in food for import and export
2008-07-17发布
2009-02-01实施
中、,人民、,共利、国发布
国质量嗌督检验疫总局
SN/I2099-2008
前言
本标准的附求A、附录B均为规范性附求
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出归。
木标起草单位:中华人民共和国福建出人境检验疫局、中国檢验檢疫科学研究院。
本标沮卞要起草人:郑晶、黄晓蓉、赵贵明、翁国柱、吴芸芸、郑轔毅、陈彬、邵碧英。
本标准系首次发布的出人境检验检疫标准。
SN/2099-2008
进出口食品中绿脓杄菌检测方法
范围
本标准规定了食品中绿脓杆菌的定性和定量检测方法。
本标准适用于各类食品中的绿脓杆菌检测,可参考此法检测水的绿脓杆菌
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的州用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所イ
的修改单(不包括勘误的内容)或修订j版均不适用于本标往,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究
是否可使用这些文件的最新版木。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
GB/T1789.282003食品微生物学检验染色法、培养基和试剂
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准
绿脓杄菌属假单胞菌属( pseudomonas)
亦名为铜绿假単胞菌,只荚膜、鞭毛,为无芽胞的栉氏阴性杆菌,能分解蛋质,发酵糖类能力较低
能产生炳种水溶性色素:一种是绿脓菌素·为蓝绿色的吩嗪类化合物,无荧光性,另一种为荧光素,呈绿色。
4设备和材料
4.1恒温培养箱:36℃+1℃、42℃。
4.2显微镜:带油镜头。
4.3均质器
4.4高斥火菌器
4.5天平:精度0.1g
4.6 VITEK全自动微生物豁定系统或类似设备。
VITEK是由法国生物梅里埃公司提供的户产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不表示
对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效产品
4.7吸管:1mL,分刻度0.1mL;10mL,分刻度1mL。
4.8可调移液器:10L~100L,100zL~1000xL。
4.9试管:15mn×100mm
4.10灭菌平皿:直径90mm,底部平整的玻璃或·次性塑料灭菌平皿
4.11火菌的样品处理器具:镊了、剪刀、勺了。
4.12质控菌株:録脓杆菌标菌株ATCC9027,恶炅假単胞菌ATCC.49128或其他经过验证的只有
?同生物学特征的同类菌株。
培养基和试剂
除另有规定外,所用试剂均为分析纯,试验用水应符合GB/T6682的规定。
CDLP増菌液:见第A.1章。
5.2磷酸絀冲稀释液:见筇A.2章。
SN/I2099-2008
5.3假单胞菌CFC选择性培养基:见第A.3章
5.4假单胞菌CN选择性培养基:见第A.4章。
5.5氧化试验:按GB/T4789.28-2003中3.18规定。
5.6乙酰胶培养基:见第A.5章。
5.7匍菊糖盐培养基:见第A.6章
5.8精氮酸双水解珻培养基:见第A.7章。
5.9硝酸盐蛋白胨水培养基:见第A.8章
5.10明胶培养基:见第A.9章。
赖氮酸脱焌珻培养基;见第A.10章
5.12营养琼脂:见第A.11章
5.13API20NE测试条
5.14GNI+测试卡
注:API20NE測试条和GNI-测试卡是出法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这信息是为了方使
本标准的使川者,并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果,则可使川这些等效产品。
6检验程序
6.1方法提要
食品中绿脓杆菌的检验方法是通过选择性增菌、分离、生化鉴定等方法对食品中可能存在的绿胀杆
进行定性和定量的检验
6.2检验程序
绿脓杄菌的检验程序见图1。
样品25g(25m
22mL灭生理盐水(ODW)或酸盐级冲稀释波
225mL.SCDI.P增菌液
36℃士1℃24h+2h
ImL转种10 IL SCDLP增肉汤3×3管
36℃士1℃24h±2h
接种CFC和CN平板
℃±1℃24h+2h
挑选可疑蘭落,接种营养琼脂斜面
36℃+1℃18h~24h
兰氏染色、氧化晦试验
APT20NE、GNT鉴定
赖
氨酸双
酸
盐
明胶液
氨
C
糖
脱
报告结果
胺
酸
羧
解芦
报告结果
图1绿脓杄菌检验程序示意图
SN/2099-2008
7检验步骤
7.1样品的存放
如为冷冻样品,应」2C~5℃解冻,不超过18h,若不能及时检验,应置」小」j-15℃保存。
非冷冻的易腐样品应尽可能及时检验,若不能及时检验,应置于4℃冰箱保存,并在24h内检验
7.2绿脓杆菌定性检验
7.2.1按元菌操作収检样25g(25mL)至225 ML SCDLP增菌液中,充分摇匀,于36℃士1℃培养
24h士2h。
7.2.2接种SCID1.P增菌培养物按7.4进行分离鉴定
7.3绿脓杆菌定量检验(MPN法)
7.3.1无操作取样品25g(25mI),放人灭菌均质杯或均质袋中,加225mI.灭菌生埋盐水或憐酸盐
缓冲稀释液,均质混匀,制成1:10稀释液。
7.3.2用10mL火菌吸管吸取1:10稀释液10mL,加入装有90mL菌生理絀水或磷酸盘冲稀
释液的广口瓶中,混合均匀,制成1:100稀释液
7.3.3每一稀释度换取一支10ml.火菌吸管,按上述操作进行10倍递嶒桸释
7.3.4根据对样品污染情况的估计,选择三个连续适宜的稀释度。每个稀释度接种三管 SCDLP肉
汤,每管接种1mL。样品的最高稀释度应达到能获得阴性终点,凿36℃士1℃培养24h士2b。如有
绿脓杄菌生长,培养液表面通常イ一层薄菌膜,培养液常呈黄绿色或蓝绿色。
7.4分离鉴定
7.4.1分离培养
每份增菌液用接种环分别刘线接种丁CFC平板和CN半板,凿、36℃士1℃培养24h士2h,观察菌
落形态。绿聡杆菌在这两种平板:通常呈现圆形、平滑、湿润的黄绿色菌落,在紫外光照射下可妣察到
光。少数不形成黄绿色菌落,但有特姝芳香气味。从每个平板上挑取5个可疑菌落,分别接种到营养
琼脂斜而上,36℃士1℃培养18h~24h,取纯培养物进行鉴定。
7.4.2氧化酶试验
挑取斜面上的纯培养物,按GB/T4789.28-2003中3.18进行氧化悔试验,绿脓杆菌氧化试验
呈阳性。
7.4.3革兰氏染色
挑取斜面上的纯培养物,按GB/"T4789.28-2003中2.2进行革兰氏染色,绿脓杆菌为革兰氏阴性
杆菌。
7.4.4鉴定
革兰氏染色阴性、氧化梅阳性的培养物应用API20NE测试条、 VITEK生化総定系统或按7.
7.