GBT 14965-1994 食物中氨基酸的测定方法.pdf

中华人民共和国国家标准
GB/T14965-94
食物中氨基酸的测定方法
Method for determination of amino acids in foods
1主题内容与适用范
本标准规定了用氨基酸自动分析仪测定食物中氨基酸的方法。
本标准适用于食物中的天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、胂氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、蛋氨
酸、异亮氨酸、亮氨酸、路氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸等十六种氨基酸的测定。其最低检出
限为10pmo
本标准不适用于蛋白质含量低的水果、蔬菜、饮料和淀粉类食物的氨基酸测定。
2原理
食物蛋白质经盐酸水解成为游离基酸,经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后,与茚三翮溶液产生
颜色反应,再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。
3试剂
全部试剂除注明外均为分析纯,实验用水为去离子水。
3.1浓盐酸:优纯
3-26mol/L盐酸:浓盐酸(3.1)与水1:1混合而成。
3.3苯酚:须重蒸镪。
3-4混合氨基酸标准液く仪器制造公司出售):0.00250mol/L。
3-5缓冲液
3.5.1pH2.2的柠檬酸钠级冲液:称取19.6g柠檬酸钠(Na3CH,O1?2H2O)和16.5mL.浓盐酸加水
稀释到10009L,用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.2
3.5.2pH3,3的柠檬酸钠缓冲液:称取19.6g柠檬酸钠和12mL浓盐酸加水稀释到11000mL,用浓
盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至3.3。
3.5.3pH4.0的柠檬酸鈉缓冲液;称取19.6g柠檬酸納和9mL浓盐酸加水稀释到1000rmL,用浓盐
酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。
3-5.4pH6.4的柠檬酸钠缓冲液:称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠(优级纯)加水稀释到
1000mL,用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4。
3.6茚三酮溶液
3-6-1pH5.2的乙酸锂溶液:称取氢氧化锂(LiOH?H2O)168g,加入冰乙酸(优级纯)279mL,加水稀
释到1000mL,用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至5.2。
3.6-2茚三酮溶液:取150mLニ甲基亚矾(C2H1OS)和乙酸锂溶液(3.6.1)50mL加入4g水合茚三
(C,H,O。:H2O)和0.12g还原茚三酮(C1HO。?2H-O)搅拌至完全溶解
3.7高纯氮气:纯度99.99%。
中华人民共和国卫生部1994-03-18批准
1994-09-01实施
GB/T1496594
3.8冷冻剂:市售食盐与冰接1:3混合。
4仪器和设备
4.1真空泵。
4.-2恒温于燥箱。
4.3水解管:耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管,体积20~30mL。用去离子水冲洗干净并烘下。
4.4真空干燥器(温度可调节)
4.5氨基酸自动分析仪。
5样品处理
样品采集后用匀浆机打成匀浆(或者将样品尽量粉碎)于低温冰箱中冷冻保存,分析用时将其解冻
后使用。
6分析步
6.1称样
准确称取一定量样品,精确到0.0001g。均匀性好的样品如奶粉等,使样品蛋白质含量在10
20mg范内;均匀性差的样品如鲜肉等,为减少误差可适当增大称样量,测定前再稀释。将称好的样品
放于水解管中
6.2水解
在水解管内加6mol/L盐酸(3.2)10~15mL(视样品蛋白质含量而定),含水量高的样品(如牛奶)
可加入等体积的浓盐酸,加入新蒸馏的苯酚(3.3)3~4滴,再将水解管放入冷冻剂中,冷冻3~5min,再
接到真空泵的抽气管上,抽真空(接近0psi),然后充入高纯氨气;再抽真空充氮气,重复三次后,在充氯
气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在1101℃的恒温干燥箱内,水解22h后,取出冷却。
打开水解管,将水解液过滤后,用去离子水多次冲洗水解管,将水解液全部转移到50mL容量瓶内
用去离子水定容。吸取滤液1mL于5mL容量瓶内,用真空干燥器在40~50℃C干燥,残留物用1~2mL
水溶解,再干燥,反复进行两次,最后蒸干,用1mLpH2.2的缓冲液(3.5.1)溶解,供仪器测定用。
7测定
准确吸取0.200mL混合氨基酸标准(3.4),用pH2.2的缓冲液(3.5.1)稀释到5mL,此标准稀释
液浓度为5.00nmol/50pL,作为上机测定用的氨基酸标准,用氨基酸自动分析仪以外标法测定样品测
定液的氨基酸含量
8计算
xFxV×M
X=m×10°×100
式中:X一ー样品氨基酸含量,g/100g
c一样品测定液中氨基酸含量,nmol/50pL
F一样品稀释倍数;
レーー水解后样品定容体积,mL
M-一氨基酸分子量;
GB/T14965-94
样品质量
一折算成每毫升样品测定液的氨基酸含量
nmol/ML
10°将样品含量由ng折算成g的系数。
注:①样品氨基酸含量在1.00g/100g以下,保留两位有效数字;含量在1.00g/100g以上,保留三位有效数字
②十六种氨基酸分子量
天冬氨酸:133.1
苏氨酸:]19.1
丝氨酸:105.1;
谷氯段:147.1
铰酸:!
甘氨酸:75,]
丙氨酸:89.1;
缬氨段,】17.2;
蛋氨酸:149.2
异亮氨酸:131,2
亮氨酸:131.2a
路氨酸:281.2
苯丙氨酸:165.2;
组氮酸:155.2
换氨酸:146,2;
精氨酸:174.2。
9允许差
同实验室平行测定或连续两次测定结果相对偏差绝对值≤12%。
10其他
10.1测定条件(以 Beckman-6300型氨基酸自动分析仪为例)
缓冲液流量:20mL/h;
茚三流量:10mL/h;
柱温:50、65和70℃4
色谱柱;20cm;
分析时间:42min
10.2标花出峰顽序和保留时间