鲎试验检测土霉素注射液中细菌内毒素的方法.pdf

第40卷第1期
化工技术与开发
Vol 40 No
2011年1月
Technology Development of Chemical Industry
Jan.2011
鲎试验检测土霉素注射液中细菌内毒素的方法
韦勤1,章秋娟2
(1.广西化工研究院,广西南宁530001:2.广西欢宝药业有限公司,广西南宁530221)
摘要:通过干扰试验探讨土莓素注射液对细菌内毒素试验的干扰情况和于扰性质,采用凝胶置试验对样品中的细菌内
毒素进行检测。土霉素注射液在使用λ值为0.25EU-m'的置试剂时,其最大无干扰浓度为0.625mgmL,最小无干扰稀释
倍数为320倍。所建立方法检査土霉素注射液的细菌内毒素可行。
关键词:土莓素注射液;细菌内毒素检查法;置试验;于扰试验
中图分类号:O65
文献标识码:A
文章编号:1671-905(201)01-0043-03
土霉素为四环素类广谱抗菌药,制品为盐酸盐叫。规格:5mL/支,;无热原吸头和无热原安瓿等。
土霉素碱因口服吸收少,且含较多量差向化合物,
已慢慢地不再口服使用,现普遍使用土霉素注射2实验方法与结果
液。农业部批准的土霉素注射液质量标准中均采用2.1样品细茵内毒素限值①)的确定
热原检査法(家兔法)检测热原。近年来,美国
根据文献[4]附录的方法,确定土繹素注射液的
英国、欧洲等国家药典越来越多地以细菌内毒限值为不超过0.4EUmg1
素检査法检査药品和生物制品中的致热物质来代2.2鲨试剂(TAL)灵敏度的复核
榃热原检査法(家兔法)检测热原。据此,我们探
照文献[7]附录规定的方法,对实验所用的鲎试
索采用细菌内毒素检査法检测土霉素注射液中的剂(TAL)进行灵敏度复核。结果鲎试剂的实测灵
热原。试验证明,本法具有灵敏、快捷、经济、操敏度均在0.5~2.0%之间,结果均符合规定。正式
作简单、实用性强等优点,可用于产品质量控制分实验时取作为道试剂的灵敏度。
析
2.3于扰试验预试验
1实验材料
1)样品的稀释:以灵敏度为0.5EUmL'的TAL
为基准,计算出相应的最大有效稀释倍数(MVD),
1.1样品
并以此作为样品的基准稀释倍数:
土篝素注射液批号:0807011、0807012
MD=X=200%s=10倍
0807013,规格:10mL:2g(200万单位)。
用WBET将样品以基准稀释倍数为起点,等倍
往下稀释,得样品的系列溶液为160、320、640、
12试剂(TAL)
1280倍,记此系列溶液为sW。
批号:0710192,灵敏度()0.25EU-mL';批
(2)另制备一同样浓度系列样品溶液,但在制备
号:.0806105,灵敏度(A)0.25EUmL1
的过程中加入内毒素,使每一浓度的样品溶都含有
1.3细薗内毒素工作标准品(RSE
2λ浓度的内毒素,记此系列溶液为SE,用TAL分
批号:9801,规格60EUmL
别与SE、SW两个系列稀释液反应,依记为PPCT
1.4其它
和NPC,并作阳性对照(PC)和阴性对照(NC)
细菌内毒素检査用水(WBET)批号:(0806110,结果见表1。
收稿日期:2010-08-25
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化工技术与开发
第40卷
表1干扰试验预试验结果
AL批号
样品批号
样品的稀释倍数
PC
NC
系列
320
640
1280
PPC
0807001
0710192
0807002
NPC
0807003
NPC
十
PC
NPC
PPC
十+
0806105
0807002
NPC
++++++++++
十十
十
0807003
NPC
从表1可见,所用3批样品在各样品稀释度下敏度为0.25EUmL'的置试剂,以320倍稀释,分
均无可测出的内毒素,说明可用于干扰试验,预试别对3批样品进行细菌内毒素干扰试验确认,并计
验结果表明,本品对细菌内毒素有抑制作用,但经算以样品稀释液配制的细菡内毒素溶液反应终点
稀释320倍(0.625mgmL)以上时,其抑制作用浓度的几何均值(Et)及细菌内毒素检査用水配制
有可能排除
的内毒素溶液反应终点浓度的几何均值(Es),结
2.4于扰试验
果见表2
参照文献[细菌内毒素检査法,取2个厂家灵
表2干扰试验结果
内毒素浓度EU-mL1
TAL批号
样品批号
NC
效价EsE
0.5
0.25
0.125
0.0625
0807001
0807002
??+
E=0.25
0710192
0807003
++++
E=0.21
WBET
+??+
Es-0.25
0807001
E4=0.25
807002
++
E=0.21
0g06105
0807003
4?
??
E=0.18
1.4
WBET
++
Es=0.25
2.5样品中细菌内毒素的常规检查
320倍稀释液(0.,625mgmL)对不同厂家的鲎试
参照文献细菌内毒素检査法,取上述3批士霉剂(TAL)与细菌内毒素反应无干扰作用,从而确定
素注射液稀释320倍,以-0.25EU-mL'的鲎试剂,了土霉素注射液在使用ん值为作为0.25EUmL2的
按常规凝胶法进行细薗内毒素检查。结果样品在置试剂时,其最大无干扰浓度为0.625mgmL',最
0.625 mgml中的细菌内毒素含量均小于0.4小无干扰稀释倍数为320倍
EU-mg,且对鲎试验检查无干扰作用。
试验结果表明,土霉素注射液可用细菌内毒素
2.6结果
检査法代替热原检査法(家兔法)检测热原。
通过上述干扰试验,Es在0.5~2.λ范围内,2.7讨论
HEt与相应的Es均在0.5~2.0之间,说明本品的
(1)干扰试验预试验的目的是探讨供试品对细