GB 4789.4-1994 食品卫生微生物学检验 沙门氏菌检验.pdf

中华人民共和国国家标准
食品卫生微生物学检验
CB4789.4--94
沙『门氏菌检验
代替GB4789.4--84
Microbiclogiel examination of food hygiene
Examination of Salmone
1主题内容与透用范
本标准规定了食品中沙门氏滷的检验方法。
本标准适用于食品和食物中毒样品中沙门氏菌的检验。
2引用标准
GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂
3设各和材料
3.1天平:称取检样用。
3.2均质器或乳钵
3.3温箱:36士1℃,42℃。
3.4显微镜。
3.5灭菌广口瓶:500mL。
3.6灭菌三角烧瓶:500mL,250mL。
3.7灭菌吸管:10mI-。
3.8灭菌平皿:90mmX15mm
3.9灭菌小试管:内径3mm,长5cm。
3.10灭毛细管。
3.11橡皮乳头。
3.12载玻片
3.13酒精灯。
3.14灭菌金属匙或玻璃棒
3.15接种棒,镍铬丝。
3.16试管架、试管篓。
4培基和试剂
4.1缓冲蛋白陈水(BP):按GB4789.28中4.12规定。
4.2氧化镁孔雀绿(MM)增菌液:按GB4789.28中4.13规定。
4.3四硫酸钠煌録(TTB)增菌液:按GB4789.28中4.14、4.15规定。
4.4亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液:按GB4789.28中4.16规定。
中华人民共和围?生部1994-03-18批准
1994-09-01实施
CB4789.494
4.5亚碗酸琼脂(BS):按GB4789.28中4.19规定。
4.6DHL琼脂:按GB4789.28中4.20规定。
4.7HE琼脂:按GB4789,28中4.21规定。
4.8WS琼脂:按GB4789.28中4.23规定。
4.9S琼脂:按GB4789.28中4.22规定。
4.10三糖铁琼脂:按GB4789.28中4.26,4.27规定。
4.11蛋白胨水、靛基质试剂:按GB4789.28中3.13规定
4.12尿素琼脂(pH7.2):按GB4789.28中3.15规定。
4.13氯化钾(KCN)培养基;按GB4789.28中3.16规定。
4.14氨基酸脱羧酶试验培养基:按GB4789.28中3.12规定
4.15糖发酵管:按GB4789.28中3.2规定
4,16ONPG培养基:按GB4789.28中3.3规定
4.17半固体琼脂:按GB4789.28中4.30规定。
4.18丙二酸钠培养基:按GB4789.28中3,7规定。
4.19沙门氏菌因子血清:按26种用于初步分型;57种用于进一步分型;163种用于详细分型。
5检验程序
沙门氏菌检验程序如下
GB4789.4-94
检样
前增菌法
直增法
冻肉、蛋品、乳品
鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经
及其他加工食品
如工的食品25g+灭生理
25g+BP 225ml
盐水25mL,做成检样匀液
36土1℃」一般4h,干蛋品18~24h
10ml+MM
10ml+SC100ML
检拌匀液25mL
检样匀液25mL+
(或TTB)100mL
MM(或TTB)100mnL
SC 100ml
42℃C18~24h
36土I℃118~24h
42℃18~24h36土士1℃18~24h
BS
DHL(或HE、WS
36土1℃「40~48h
36±1℃18~24h
挑取可菌落
TSI(斜画、底层、产气、H2S)、蛋白陈水(旋基质)
尿素(pH7.)KCN,赖氨酸
H2S+基质
H2S十基质
H2S一淀基质
非如左述的
素一KCN
取一KCN
尿寮-KCN
各种反应结果
氨〔酸十
氨酸+/
甘、山梨醇
沙门氏前
沙「门氏
非沙门氏菌
非沙门氏
血学试验
血清学试
报告
6绿操作步骤
6.1前增菌和增菌
冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品均应经过前增菌。各称取检样258,加在装有25mL缓冲蛋白陈
水的500mL广口瓶内。固体食品可先应用均质器以8000~10000r/min打碎1min,或用乳钵加灭菌
砂磨碎,粉状食品用灭匙或玻棒研磨使乳化,于36士1℃培养4h(干蛋品培养18~24h),移取
0mL,转种于100mL氯化镁孔雀绿增菌液或四硫酸钠煌绿增菌液内,于42℃培养18~24h。同时,另
GB4789.4-94
取10mlL,转种于100mL亚硒酸盐胱氨酸增液内,于36±1℃培养18~24h
鮮肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品不必经过前增菡。各取25g(25mL)加入灭菌生理盐水
25mL,按前法做成检样匀液;取25mL,接种于100mL氯化镤孔雀绿增菌液或四碗磺酸钠煒绿增菌液
内,于42℃培养24h;另取25mL接种于100mL亚西酸盐胱氨酸增菡液内,于36土1℃培养18~24h。
6.2分离
取增菌液1环,刘线接种于一个亚硫酸篏琼脂平板和一个DHL琼脂平板(或HE琼脂平板、WS或
SS琼脂平板)。两种增菌液可同时划线接种在同一个平板上。于36士1℃分別培养18~24h(DHL、HE、
WS,SS)或40~48h(BS),观察各个平板上生长的菌落,沙门氏菌I、I、N、V、Ⅵ和沙门氏菌工在各个
平板上的菌落特征见表1。
表1沙门氏菌属各群在各种选择性琼脂平板上的菌落特征
选择性琼脂平板
沙门氏菌]、1、N、V、MW
沙门氏菌(即亚利桑那)
亚硫酸修琼脂
产硫化氢落为票色有金屑光泽、棕褐色或「黑色有金属光泽
灰色,落周匦培养基可呈黑色或棕色;有
些菌株不产生硫化氢,形成灰绿色的菌落,
周培养基不变
DHI琼脂
无色半透明;产硫化氢菌落中心带無色或几「乳糖迟缓阳性或阴性的菌株与沙门氏菌「
乎全色
N、V、M相同;乳鞴阳性的菌株为粉红
色,中心带黑色
HE琼脂
蓝绿色或蓝色,多数株产硫化氢,菌落中「乳糖阳性的株为黄色,中心照色或几乎全
WS琼脂
心果色或几乎全黑色
黑色,乳糖迟阳性或阴性的菌株为蓝绿色
或蓝色,中心黑色或几平全黑色
SS琼脂
无色半透明,产硫化氯岗株有的菌落中心带し乳糖迟纓阳性或阴性的菌株,与沙门氏菌
色,但不如以上培养基明显
相同乳橢阳性的菌株为粉
红色,中心色,但中心无系色形成时与大
肠艾希氏閑不能区别
6.3生化试验
6.3.1自选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落,分别接种三糖铁琼脂。在三糖铁琼脂内,肠杆菌科
常见属种的反应结果见表2。
表2肠杄菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果
斜面
底层
产
硫化氢
可能的菌属和种
沙门氏菌屑、弗劳地氏柠酸杆菌、变形杆蔥网、经
慢爱德华氏茵
+/
沙门氏菌、弗劳地氏柠酸茵、普通变形杄菌
沙