GB 4789.11-1994 食品卫生微生物学检验 溶血性链球菌检验 .pdf

中华 人 民 共 和 国 国家 标 准 食 品 卫 生 微 生 物 学 检 验 G B 4 7 8 9 . 1 1 一 9 4 溶 血 性 链 球 菌 检 验 代替 G B 4 7 8 9 . 1 1 -8 4 Mi c r o b i o l o g i c a l e x a m i n a t i o n o f f o o d h y g i e n e E x a m i n a t i o n o f S t r e p t o c o c c u s h e m o l y t i c u s 1 主皿内容与适用范围 本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法. 本标准适用于食品和食物中毒样品中溶血性链球菌的检验。 2 引用标准 G B 4 7 8 9 . 2 8 食品卫生微生物学检验 染色法、 培养基和试剂 3 设备和材科 3 . 1 温箱: 3 6 士1 C, 3 . 2 水浴: 3 6 士1 C。 3 . 3 显徽镜. 3 . 4 离心机。 3 . 5 试管架。 3 . 6 灭菌平皿。 3 . 了 灭菌小试管。 3 . 8 载玻片。 3 . 9 灭菌吸管: 1 m L , 1 0 m L , 3 . 1 0 灭菌镊子。 3 . 1 1 均质器。 3 . 1 2 酒精灯。 3 . 1 3 接种环。 4 培养基和试荆 葡萄搪肉漫液肉汤: 按G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 1 规定， 在肉浸液肉汤内加入 1 %葡萄糖。 肉浸液肉汤: 按G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 1 规定。 匹克氏肉 汤: 按G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 6 2 规定。 血琼脂平板: 按G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 6 规定。 人血浆。 0 . 2 5 % 抓化钙。 灭菌生理盐水。 月.六乙口月只心U7， 4.4.4.4.4.4.东 中华人民共和国卫生部1 9 9 4 一 0 3 一 1 8 批准 1 9 9 4 一 0 9 一 0 1 实施 G B 4 7 8 9 . 1 1 一 9 4 4 . 8 杆菌肤药敏纸片( 含0 . 0 4 单位) 。 检验程序 检样 2 6 g ( m L ) +2 2 6 .L 灭菌生理盆水 荀萄格肉搜液肉汤 或匹克氏肉汤 3 6士1 C 血平板 3 6 士1 C I 2 4 h 血平板( 分纯培养) 3 6士 I C I 2 4 h 涟段醉试验 杆菌肤敏撼试验 观察落血 革兰氏染色 报告 6 操作步骇 6 . 1 样品处理 称取2 5 g 固体检样; 称取2 5 m L液体检样， 加入2 2 5 m L 灭菌生理盐水， 研成匀浆制成混悬液。 6 . 2 一般培养 . 将上述混悬液吸取5 m L ， 接种于5 0 m L葡萄糖肉浸液肉汤; 或直接划线接种于血平板， 如检样污 染严重， 可同时按上述量接种匹克氏肉汤， 经3 6 士1 培养2 4 h ， 接种血平板. 置3 6 士1 培养2 4 h ， 挑起 乙型溶血图形突起的细小菌落， 在血平板上分纯， 然后观察溶血情况及革兰氏染色， 并进行链激酶试验 63 形态与染色 本菌呈球形或卵圆形， 直径0 . 5 - 1 d a m, 链状排列， 链长短不一， 短者 个， 链的长短常与细菌的种类及生长环境有关; 液体培养中易呈长链 芽抱， 无鞭毛， 不能运动。 4 - 8 个细胞组成， 长者2 0 - 3 0 ; 在固体培养基中常呈短链， 不形成 6 . 4 培养特性 该菌营养要求较高， 在普通培养基上生长不良 在血清肉汤中生长时管底呈絮状或顺粒状沉淀。 ， 在加有血液、 血清培养基中生长较好。 溶血性链球菌 乳光， 直径约。 . 5 - 透明的溶血圈。 血平板上菌落为灰白色， 半透明或不透明， 表面光滑， 有 0 . 7 5 m m， 为圆形突起的细小菌落， 乙型溶血链球菌周围有2 -4 m m界限分明、 无色 65 链激酶试验 致病性乙型溶血性链球菌能产生链激酶( 即溶纤维蛋白酶) ， 白酶原， 使成血浆蛋白酶， 而后溶解纤维蛋白。 此酶能激活正常人体血液中的血浆蛋 吸取草酸钾血浆0 . 2 m L ， 加0 . 8 m L灭菌生理盐水， 混匀， 再加入 1 8 - 2 4 h 3 6 士1 培养的链球菌 培养物0 . 5 m L及0 . 2 5 %氯化钙0 . 2 5 m L如氯化钙已潮解. 可适当加大至0 . 3 %0 . 3 5 %) , 振荡摇匀， 置于3 6 士1 水浴中1 0 m i n ， 血浆混合物自 行凝固( 凝固程度至试管倒置， 内容物不流动) 。然后观察凝 G B 4 7 8 9 . 1 1 一 9 4 块重新完全溶解的时间， 完全溶解为阳性， 如2 4 h 后不溶解即为阴性。 草酸钾人血浆配制: 草酸钾。 . 0 1 g 放入灭菌小试管中， 再加人5 m L 人血， 混匀， 经离心沉淀， 吸取 上清液即为草酸钾人血浆。 66. 杆菌肚敏感试验 挑取乙型溶血性链球菌液， 涂布于血平板上， 用灭菌摄子夹取每片含有。 . 0 4 单位的杆菌肤纸片， 放 于上述平板上， 于3 6 士1 培养1 8 2 4 h ， 如有抑菌带出现即为阳性。同时用已知阳性菌株作为对照。 附加说明: 本标准由 卫生部卫生监督司提出。 本标准由北京市卫生防疫站负贵起草。 本标准主要起草人刘以贤。 本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。