DB13T 1567-2012 葡萄品种DNA指纹鉴定方法.pdf

CS65.020.01
B O
1DB13
河北省地方标准
DB13/T15672012
葡萄品种DNA指纹鉴定方法
2012-07-03发布
2012-07-15实施
河北省质量技术监督局发布
DB13/T1567--2012
前
本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草
标准由河北省林业局提出。
本标准起草单位:河北农业大学。
本标准主要起草人:梁海永、杨敏生、刘兴菊、宪立杰、张军、杨立华、王进茂、甄红伟、姚伟明
周哓霞、工瑞霞。
ww. by [XW.con
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DB13/T1567~-2012
葡萄品种DNA指纹鉴定方法
范围
本标准规定了葡萄品种呱A指纹鉴定的方法及判定标准。
本标准适用于河北省俌萄品种鉴定及葡萄品种爪A指纹库的建立,其他省份可参照执行。
原理
葡萄全基因组测序已经完成。不同葡萄品种出于遗传组成不同,基因组纽DNA中简単重复序列的重
复次数有差异,这种差异可经过PCR扩增、电泳分离、显色程序绘制的DNA指纹图谱加以区分,从而
对不同品种进行鉴定。从葡萄幼苗、叶片等组织中提取总INA,利用SSR引物对位于不同染色体上的SR
位点进行PCR扩增,不同碱基长度的PCR扩増产物通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离(或通过A分析仪、测
序仪进行分离),并通过染色显示DNA指纹谱带类型。
3仪器设备及试剂
仪器设备及试剂名单见参附录A。
溶液配制
相关溶液配制方法见附录B。
5操作程序
5.1样品准备
5.1.1取样量
每份送检样品至少检测3个个体,对一致性差的样品应増加检测个体至5个。
5.1.2品种比较方式
成对品种的比较:送检样品提供两份,一份为待检品种,一份为对照品种。将待检品种与对照品种
直接进行成对比较。杂交后代需提供母本与父本的样品。
种与叭A指纹库入库品种的比较:送检样品可提供一份。将待检样品与A指纹库所有入床品种的
指纹进行比较,筛选出指纹最相似或相同的品种作为待检品种的近似品种,然后将待检品种与近似品种
直接进行成对比较。
2DNA提取