荧光素标记噬菌体抗体的制备及其应用.pdf

乔嫒嫒,等荧光素标记噬菌体抗体的制备及其应胆
荧光素标记噬菌体抗体的制备及其应用
乔媛媛',张达矜',王珊珊,熊鸣',赵晓航
Fluorescent- labeled phage SCFV antibody preparation and their application
Qiao Yuanyuan Zhang Dajin Wang Shanshan, Xiong Ming, Zhao Xiaohang
Center for Basic Medical Sciences y eal Hsp d of hinese PA, Being 100048, We g Medcad e g
Weifang 261053, China
(Abstract] Objective: To prepare fluorescein directly conjugated phage Scf'v antibodies system and to detect tumor
cells and tissue. Methods: After generation, fluorescein isothiocyanate (FITC)and tetramethyl rhodamine isothio cya-
male (RITC) labeled phage SCFV antibodies were evaluated binding activity of tumor cells or leukocytes, and were ob
served by immunofluorescence and confocal methods. Results: The results of immunofluorescence and scanning confo
cal microscope demonstrated that fluorescein labeled phage SCFV antibodies had remarkable affinity with tumor cells
and were mainly bound at cell membrane. There were differences in the binding activity with leukocytes. Conclusion
The fluorescein-labeled phage Scfv antibodies as imaging agents in cell and tissue had value in the immunoassay
and were confirmed better immune biological activity
Key words) fluorescein; phage SCFV antibody; immunofluorescence; tumor cells
Modern Oncology2015,23(02):0166-0170
【摘要】目的:通过直接荧光素标记方法制备荧光标记的暶菌体单链抗体,并且对于肿瘤细胞的免疫学活性
进行检测。方法:用异硫氰酸荧光素( fluorescein isothiocyanate, FITC)和四甲基异硫氰酸罗丹明( tetramethy!
rhodamine isothio cyanate, TRITC)标记的単链噬菌体抗体对肿瘤细胞进行直接染色,通过荧光微镜和激光扫
描共聚焦显微镜檢洌观察单链抗体与瘤细胞及白细胞的荧光显色情况。结果:荧光显微镜和激光扫描共
聚焦显微镜檢测证实标记荧光素FIC、 TRITC的噬菌体抗体与肿瘤细胞有较好的特异性结合,主要结合在细
胞膜的表面。比较荧光的强度,与白细胞结合活性有差异。结论:用荧光素标记的噬菌体单链抗体能够作为
检测试剂用亍细胞、组织的检测,具备应用于免疫检测分析的价值,进一步证实所筛选的抗肿瘤细胞噬菌体
抗体具有较好的免疫生物学活性。
【关键词】荧光素;噬菌体单链抗体;免疫荧光;肿瘤细胞
【中图分类号)R730.45
【文献标识码)A
DOI:10.3969/j,issn.1672-4992.2015.02.06
文章编号】1672-4992-(2015)02-0166-05
目前各种类型的高通最筛选技术相继研发,包括文库筛应,鉴定分子之间的相互作用,在结合鉴定、靶标筛选与组织
选、酵母双杂交及噬菌体展示技术等应用。筛选得到的靶向定位等研究中有一定的实用意义'2。荧光素标记具有操
小分子抗体及各种配体,在认识人类疾病中发挥着重要作作简单、快速、炭光色泽与背景色泽对比鲜明、有些标记后仍
用,主要用于药物发现、系统生物学及分子显像等方面的研保持生物学活性和免疫活性及安全无毒等优点,可以用于各
究。荧光素标记技术已广泛应用于生物分子、细胞、病原微种检测。本文旨在制备FITC和 TRITC荧光素标记的单链噬
生物等的常规檢测中,将荧光色素标记在抗体或抗原上,与菌体抗体,应用于肿瘤细胞的检测,以期将筛选到的噬菌体
其相应的分子结合后,在荧光显微镜下呈现特异性荧光反抗体用于免疫诊断检测。
1材料与方法
1.1细胞和单抗
【收稿日期)2014-04-0
食管癌细胞KYSE-170为日本兵库县医学院 Shimada
【修期)2014-(04-24
Y教授惠赠;食管癌细胞EC109为海军总医院基础研究中心
基金项目】海军总医院海洋医学与救援联合研究基金(编号:实验室保存。
20120003
【作者单位】海军总医院基础研究中心,北京100048
1.2主要试剂
2潍坊医学院,山东潍坊261053
本室构建的大容量噬菌体抗体库;2YT培养液配制方
【作者简介」乔媛媛(1975-),女,东人,博土,主管技师,主要从法:蛋白胨1.6%,酵母提取物1%,氯化钠0.5%;LB琼脂糖
事肿瘤标记物的研究。F.-mail:taoyuan75126.com
培养基:琼脂糖1.5%,蛋白胨1%,酵母提取物0.5%;DPBS
【通汛作者】赵晓航(1957-),女,北京人,研究员,主要从事瘤(0.20g/IKCI、0.047g/ L Mgcl2、1.158g/LNa2HPO、0.20g/L
标记物的研究:E-mail:xhzlao@]26.com
NaI1PO,、8.00g/LNa(CI)。表面特殊处理载玻片购自' Thermo