5-氯水杨酰肼三苯基氯化锡体外抗肿瘤作用研究.pdf

第42卷第12期
中国海洋大学学报
42(12):065~069
2012年12月
PERIODICAL OF OCEAN UNIVERSITY OF CHINA
5-氯水杨酰肼三苯基氯化锡体外抗肿瘤作用研究
王緩煖,威欣,李大成2,李静
(1.中国海洋大学医药学院,山东青岛2603:2.聊城大学化学化工学院,山东聊城252059)
摘要:研究5氯水杨酰肼二苯基氯化锡(LPY-3)体外抗肿瓣作用及作用机制。采用MTT法检测1.PY-3对HO890、
Hl、A549等6种肿瘤细胞的生长抑制作用;用 Western Blotting法檢测LPY-3对H(O8910细胞中凋亡相关信号分子及
DNA断裂标志蛋白yH2AX的诱导作用;用DNA凝胶电泳检测IPY-3对pBR322质粒的DNA断裂作用。结某表明,
IPY-3对HO-8910、FHla、A549等细胞有显著的增殖抑制作用,I〔值在,.12~-0.26molL浓度范围内;能够诱导HO
8910细胞中凋亡相关信号分子 Caspase-9、 Caspase3、CyC、PARP剪切,Bcl2表达降低,γH2AX表达升高;对pBR322
质粒有DNA断裂作用
关键词:5-氯水杨酰肼三苯基氯化锡;抗肿羶活性;细胞濁亡;DNA断裂
中法分类号:R961
文献标志码:A
文章编号:1672-5174(2012)1206505
自顺铂作为抗肿瘤苭物被开发应用以来,无机金(杭州四季青生物工程有限公司);噻唑兰(MTT,上海
属配合物药物已成为新一类抗癌化疗药物3。1972索菜宝生物科技有限公司);抗 caspase-3、 Caspase-9
年 Brown研究发现 Phi Snc2CCH?3具有抑制小鼠肿瘤CytC、PARP、Bax、Bl2、@ actin、yH2AX等分子抗
生长作用,伯此人们开始不断加强对有机锡配合物的体、HRP羊抗鼠二抗、HRP-羊抗免二抗(美国Cel
合成、结构及生物活性硏究,众多新型有机锡配合物被 Signaling公同);化学发光试剂盒(美国 Thermo公
发现对肿瘤细胞具有明显的增殖抑制作用,因此有机司);pBR322质粒(美科美生物医学科技有限公司);线
锡配合物在未来具有极高的应用价值,可开发成为新粒体提取试剂盒(碧云天生物试剂有限公司);其他试
类的高效抗癌药物。聊城大学化学化工学院在对剂均为上海生工生物有限公司产品
ド铂、顺铂等经典药物进行分析的基础上,以锡为核心
合成了一系列锡金属配合物,其中研究发现5-氯水杨
酰肼三苯基氯化锡(LPY3,见图1)在体外具有较强的
抗肿瘤活性,该化合物是一种结构新颖的酰肼类化合
物(专利号:2010100114.2)?。本文主要采用MTT
法检测了LPY-3对肿瘤细胞HO-8910、Hla、A549
HT-29、MDA-MB-435及K562的增殖抑制作用,通过
Western Blotting法探讨了其对HO8910细胞中凋亡
相关蛋白表达的影响,并对其作用靶点进行了初步探
讨,以期为进一步研究LPY3抗肿瘤作用提供参考依图15氯水杨配肼三苯基氯化锡配合物(PY3的分子结构
据
ig. 1 The molecular structure of (Ph Srt
(HL9) (C/ O2 N2
1材料与方法
1.1.2细胞株卵巢癌细胞HO-8910、官颈瘺细胞
1.1材料
Hdla、肺腺癌细胞A549、结肠癌细胞HT-29、乳腺癌细
1.1.1主要试剂LPY3由聊城大学化学化工学院胞 MDA-MB-435、白血病细胞K562均购自中国科学
提供,纯度为9.5%,实验中以DMSO作为溶剂溶解
院上海细胞学研究所
注射用顺铂(江苏恒瑞医药股份有限公司,08121921);1.1.3主要仪器超净工作台、台式高速冷冻离心
RPM1640培养基(美国 Gibco公司);新生小牛血清机、CO培养箱(德国 Heraeus公司);倒置相差显鏡
(日本奥林巴斯公司);蛋白电泳系统(美国伯乐公司);
收稿日期:211-1223;修订日期:2012-09-19
作者简介:正媛媛(1984),女,预上,研究方问:肿痈药琪学
通讯作者:Email:]lilac@163.com
万方数据
中国海洋大学学报
201
半十转膜装置(大连竟迈生物科技有限公司);凝胶扫Bax、Bl2、yH2AX进行显影分析,以β actin为内参。
描成像系统(北京赛智创业科技有限公司); Rainbow1.2.5琼脂檐凝胶电泳实验用TE缓冲液(pH=7.5)
联免疫酶标测定仪(奥地利 Tecan公司)
配制系列浓度LPY-3溶液,取0.5gg(1wL)pBR32
1,2方法
质粒与19gL不同浓度LPY-3溶液混合,37℃水浴將
1.2.1细胞培芥用含体积分数为10%的小牛血育2h后用1/6体积的6X溴酚蓝上样缓冲液终止反
清、L谷氨酰胺、1×105UL青霉素和100mg/L链霉应。以TAE绶冲液(pI=7.5)配制1%琼脂凝胶,
素的 RPMII640完全培养液,在37℃、5%CO2及饱和100℃加热溶解,加入1滴溴化乙绽(0.5g/mL),灌
湿度的细胞培养箱中培养。细胞为贴壁生长,传代时胶,上样、室温下恒压(100V)电泳1.5h,资胶图像分
用0.25%胰酶( Trypsinase)消化2-~4min,倾弃胰酶析仪紫外下观察、拍照
斤加适量培养液,将细胞吹打成单个悬浮细胞,2~3d
传代一次,取对数生长期细胞用于实验。
2结果
1.2.2MTT法考察LPY3的肿瘤細胞增殖抻制活性2.1LPY3对脚瘤细胞的增殖抑制作用
取对数生长期细胞,吹匀计数,4000/孔接种于96
L.PY-3分別作用于肿瘤细胞HO-8910、Hela
孔板,180L/孔,置37℃、5%CO2的培养箱中孵育
A549、HT-29、MDA-MB-435、K56272h后,对其生长
24h后,实验组依次加入系列浓度的LPY320L,对增殖均具有明显的抑制作用,且呈浓度依赖性,结果如
照组加终浓度为1%的DMSO20L,空白孔加入完全
图2所示。经IC软件计算得出各细胞株经LPY-3作
养基20u,各組均设4个复孔,置培养箱中作用用72h后的IC。值分别为D.26、0.20、0.16、0.12
72h后,各孔加入MTT(5mg/mlL)20rL,37℃孵育0.14和?.20mol/L,说明LPY3具有显著的体外广
4后弃上清并在各孔加人150 L DMSO溶解申獷,谱抗肿瘤增殖活性。
用酶标仪在检测波长570nm,参比波长630nm处测
120
定吸光值,讣算细胞生长抑制率(IR)和ICa值。IR
HIO-8910
00
(1ー一OD物軍/OD)対照組)×100%,使用 Calcusyn软件计
算IC值。
80
-MIDA-MB-435
1.2.3MTT法考察IPY3在各时问点对肿藉细胞
40
HO-8910的增殖抑制作用取对数生长期HO
20
8910细胞,吹匀计数,4000/孔接种于96孔板,180
0
pL/孔,置37℃、5%CO2的培养箱中孵育24h后,实
0.06250.1250.250.51
验组依次加人系列浓度的LPY320L,对照组加终
LPY-3浓度 Conc