QWSY 01-2010 葡萄糖氧化酶.pdf

X41
WSY
河北省微生物研究所企业标准
QWSY01-2010
葡萄糖氧化酶
2010-05-18发布
2010-05-18实施
河北省微生物硏究所发布
O/WSYO1--2010
本标准由河北省微生物研究所提出并起草
本标准起草人:胡常英马清河
Q/WSYo1一
葡萄糖氧化酶
范围
本标准规定了食品添加剂葡糖氧化嗨的技术要求、试验方法、标识、包装、运输和储存。
本标准适用于由发酵法生产、经提纯制取、用于食品、饲料、医约等方面的葡绱糖氧化酶。
2.规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注口期的版本适用」本文件。
凡是不注期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件
食品安全国家标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定
B/T4789.3-2010
食品安全国家标准食品卫生微生物学检验大肠菌群计数
GB/TI4789.4-2010
食品安全国家标准食品卫生微生物学检验沙『」氏菌检验
GB/T5009.22-2003
食品中黄曲零毒素B⊥的测定
GB/T5009.752003
食品添加剂中铅的测定
GB/T5009.76-2003
食品添加剂中砷的测定
GB/T6682-2008
分析实验室川水规格和实验方法
3.定义
酶活力
在pl6.0、温度30℃的条件下,每分钟能把1.0umo1的β-D一葡菊糖氧化成D一葡萄糖酸和I
所需的酶量为一个单位。
技术要求
1外观
浅萸色或淡憕色透明液体,无悬浮物。
4.2理化指标
产品理化指标应符合表1规定。
QパWSYO1-2010
令表1
葡萄糖氧化酶理化指标
活力
U/ml
50+3
酶活保存率(28℃,12个月内)%≥
(以Pb计)mg/I
砷(以As计)mg/I.
0.5
黄曲霉毒素Blμg/L
菌落总数(杂菌总数)个/mL
100
大肠菌群个/100mL
沙门氏菌(致病菌)
不得检出
5.实验方法
本标准中所用试剂除特殊注明外,均为分析纯,所用水应符合(G6682三级水规格
5.1外观
样品注入50ml.比色管中,目视检验。
5.2酶活力
5.2.1原理
在葡萄糖氧化酶的作川下,葡萄糖和氧反应,生成葡萄糖酸和过氧化氢,过氧化氢和无色的还原型
邻联茴香胺在过氧化物晦的作用下,生成水和红色的氧化型邻联茴香胺
5.2.2.试剂和溶液
5.2.2.1磷酸盐缓沖液(pH6.0)
称取16.61 r Nall, PO2l10和35.82 z NamlipいO?1210溶丁尢CO2水中,稀释到1000mL。岗种试剂须预
先在120土10℃条件下干燥小时。
2.2.2邻联茴香胺甲醇缓冲液
称取1g邻联茴香胺加在100mL甲醇中搅溶解备用。临用时现配。取0.1mL加入到上述缓冲液12mlL
中混匀。
5.2.2.3180g/L葡萄糖水溶液
18g葡萄糖加在100L蒸馏水中搅拌溶解。
5.2.2.4辣根过氧化物酶溶液
配成1mg/m.溶液,取0.5m.再加水1mL。
O/WSYO1--2010
5.2.3仪器设备
721ー分光光度计;
可调恒温水浴钠
秒表:精度1/10s。
5.2.4分析步骤
吸取10ml.样品加入到500mM.容量瓶中,稀释至刻度摇匀,备川。取两支浩净试管,分别加入邻联
茴香胺甲崞缓冲液(5.2.2.2)2.5ml,葡萄糖溶液(5.2.2.3)0.3m,辣根过氧物酶溶液(5.2.2.4)0.1mL,
30℃恒温水浴中,恒温后向其中一管加入0.1mL.蒸馏水,以空白管调零,随后向样品管中加入0.1ml
样品溶液摇匀,立即在460m波长处用1cm杯比色。读取初始吸光度值为A。并计时,反应1min时读取
吸光度值为A1,得出△A=A1-A
5.2.5结果的表示与计算
悔活力X1(U/m.)按(1)式计算:
△A4c0
Xf……………………………(1)
11.3X+X/B
式中
消光系数
--反应时间(min);
A…--样品体积(m.);
B…--反应液体积
酶液稀释倍数
5.3酶活力保存率
5.3.1操作步骤
取已知酶活力的样品100m.,放入试剂瓶中蜡封,在2一8℃条件下保存12个月后,按本标准5.
的规定测定晦活力
5.3.2结果的计算
活保存率X(%)按(2)式计算。
⊥00%
式中
储存酶活力
Fa-一初始酶活力。