GBT19857-2005 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定.pdf

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ICS67.120.30
B 5
GB
中华人民共和国国家标准
GB/T19857~-2005
水产品中孔雀石绿和结晶紫
戏留量的测定
Determination of malachite green and crystal violet residues
aquatic p
'oduct
2005-09-05发布
2005-09-05实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会发布
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GB/T19857--2005
前
言
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由全国水产标准化技术委员会归。
本标准起草单位:中华人民共和国上海出入境检验检疫局、厦门出人境检验检疫局、广东出人境检
验检疫局、福建出人境检验检疫局、江苏出人境检验检疫局、北京出人境检验检疫局、宁波出入境检验检
疫局。
本标准主要起草人:郭德华、施冰、杨惠琴、林峰、李波、张志刚、林海丹、王传现、陈鹭平、盛永刚、
李耀平、杨芳、陈惠兰、张朝晖、殷居易、林立毅、袁辰刚
本标准系首次发布的国家标准。
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GB/T19857~-2005
水产品中孔雀石绿和结晶紫
残留量的测定
范围
本标准规定了水产品中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿( leucomalachite green)、结晶紫及其代
谢物隐色结晶紫( leucocrystal violet)残留量的液相色谱串联质谱和高效液相色谱的测定方法。
本标准适用于鲜活水产品及其制品中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿、结晶紫及其代谢物隐色
结晶紫残留量的检验。
液相色谱-串联质谱法
2.1原理
试样中的残留物用乙腈-乙酸铵缓冲溶液提取,乙腈再次提取后,液液分配到二氯甲烷层,经中性氧
化铝和阳离子固相柱净化后用液相色谱-串联质谱法测定,内标法定量
2.2试剂和材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为重蒸馏水
2.2.1乙腈:液相色谱纯。
2.2.2甲醇:液相色谱纯。
2.2.3二氯甲烷。
2.2.4无水乙酸铵。
2,2.55mol/L.乙酸铵缓冲溶液:称取38.5g无水乙酸铵溶解于90mL水中,冰乙酸调pH到7.0,用
水定容至100mlL。
2.2.60.1mol/L乙酸铵缓冲溶液:称取7.71g无水乙酸铵溶解于1000mL水中,冰乙酸调pH到4.5。
2.2.75mol/L乙酸铵缓冲溶液:称取0.385g无水乙酸铵溶解于1000mL水中,冰乙酸调pH到
4.5,过0.2m滤膜。
2.2.8冰乙酸。
2.2.90.25g/mL.盐酸羟胺溶液
2.2.101.0mol/L对-甲苯磺酸溶液:称取17.2g对-甲苯磺酸,用水溶解并定容至100mL。
2.2.11体积分数为2%的甲酸溶液。
2.2.12体积分数为5%的乙酸铵甲醇溶液:量取5mL乙酸铵缓沖溶液(2.2.5)用甲醇定容至
100mIL。
2.2.13阳离子交换柱:MCX,60mg/3mL,使用前依次用3mL乙庸、3mL甲酸溶液(2.2.11)活化。
2.2.14中性氧化铝柱:1g/3mL,使用前用5mL乙腈活化。
2.2.15标准品:孔雀石绿(MG)、隐色孔雀石绿(LMG)、结晶紫(CV)、隐色结晶紫(LCV)、同位素内标
氘代孔雀石绿(D。-MG)、同位素内标氘代隐色孔雀石绿(D。-LMG),纯度大于98%
2.2.16标准储备溶液:准确称取适量的孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫、氘代孔雀石绿、
氘代隐色孔雀石绿标准品,用乙腈分别配制成100g/mL的标准储备液
2.2.17混合标准储备溶液(1gg/mL):分别准确吸取1.00mL孔雀石绿、结晶紫、隐色孔雀石绿和隐
色结晶紫的标准储备溶液(2.2.16)至100mL容量瓶中,用乙腈稀释至刻度,1mL该溶液分别含1pg
的孔雀石绿、结晶紫、隐色孔雀石绿和隐色结晶紫。-18℃避光保存。
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GB/T19857-2005
2.2.18混合标准储备溶液(100ng/mL):用乙腈稀释混合标准储备溶液(2.2.17),配制成每毫升含孔
雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫均为100ng的混合标准储备溶液。-18℃避光保存。
2.2.19混合内标标准溶液:用乙腈稀释标准溶液(2.2.16),配制成每毫升含氘代孔雀石绿和氘代隐色
孔雀石绿各100ng的内标混合溶液。一18℃避光保存。
2.2.20混合标准工作溶液:根据需要,临用时吸取一定量的混合标准储备溶液(2.2.18)和混合内标标
准溶液(2.2.19),用乙庸+5mmol/L乙酸铵溶液(1+1)稀释配制适当浓度的混合标准工作液,每毫升
该混合标准工作溶液含有氘代孔雀石绿和氘代隐色孔雀石绿各2ng。
2.3仪器和设备
2.3.1高效液相色谱-串联质谱联用仪:配有电喷雾(ESD)离子源
2.3.2匀浆机。
2.3.3离心机:4000r/min。
2.3.4超声波水浴。
2.3.5旋涡振荡器。
2.3.6KD浓缩瓶:25mL
2.3.7固相萃取装置。
2.3.8旋转蒸发仪。
2.4样品制备
2.4.1鲜活水产品
2.4.1.1提取
称取5.00g已捣碎样品于50mI.离心管中,加入200pL混合内标标准溶液(2.2.19),加人11mL
乙腈,超声波振荡提取2min,8000r/min匀浆提取30s,4000r/min离心5min,上清液转移至25mL
比色管中;另取一50mL离心管加入11mL乙庸,洗涤匀浆刀头10s,洗涤液移入前一离心管中,用玻
棒捣碎离心管中的沉淀,旋涡混匀器上振荡30s,超声波振荡5min,4000r/min离心5min,上清液合
并至25mL比色管中,用乙庸定容至25.0mIL,摇匀备用
2.4.1.2净化
移取5.00mL样品溶液加至已活化的中性氧化铝柱(2.2.14)上,用KD浓缩瓶接收流出液,4mL
乙肩洗涤中性氧化铝柱,收集全部流出液,45℃旋转蒸发至约1mL,残液用乙腈定容至1.00mL,超声
波振荡5min,加人1.0mL5mmol/L乙酸铵,超声波振荡1min,样液经0.2gm滤膜过滤后供液相色
谱-串联质谱测定。
2.4.2加工水产品
2.4.2.1提取
称取5.00g已捣碎样品于100mL离心管中,加人200L混合内标标准溶液(2.2.19),依次加入
1mL盐酸羟胺(2.2.9)、2mL对-甲苯磺酸(2.2.10)、2mL乙酸铵缓神溶液(2.2.6)和40mL乙腈,匀
浆2min(10000r/min),离心3min(3000r/min),将上清液转移到250mI.分液漏斗中,用20mL乙
腈重复提取残渣一次,合并上清液。于分液漏斗中加入30mL二氯甲烷、35mL水,振摇2min,静置分
层,收集下层有机层于150mL梨形瓶