分光光度测定总黄酮法的适用性.pdf

第38卷
分析化学( FENXI RUAXUR)研究简报
第6期
2010年6月
Chinese Journal of Analytical Chemistry
893~896
DOI:10.3724/SP.J.1096,2010,00893
分光光度测定总黄酮法的适用性
池玉梅居羚邓海山姚卫峰陆丹
(南京中医药大学药学院,南京210046
摘要为建立测定天南星总黄酮含量的方法,通过比较黄酮及苷、黄酮醇及3位苷共12个化合物的
NaNO2-AI(NO3)3-NaOH法和AlCl2-KAc法的紫外和可见光谱,分析了分光光度测定总黄酮法的适用性。结
果显示,与相应方法的有关原理相矛盾,尤其是芹菜素及苷在两方法中均未有相应现象产生。为此,进行了新
方法研究,比较了各黄副在三乙胺介质中的紫外可见光谱,结果显示,黄酮及苷和3-黄酮醇苷最大吸收均红
移;将三乙胺法应用于天南星,方法验证结果符合含量测定要求,对照品夏佛托苷在1.54~-21.5mg/L范围内
与吸光度有良好线性关系(r=0.9997),平均回收率为99.3%(RSD=1.1%,n=9)。方法重现性好,可操作
性强。适用性硏究表明,3种方法均只适用于部分黄类成分分析。
关键词黄酮;紫外可见分光光度法;天南星;三乙胺
引言
黄嗣类化合物( Flavonoids)是广泛存在于自然界中的一大类化合物,常以游离态或糖苷形式存在,
具有抗菌消炎、扩张冠状动脉、防治高血压及脑溢血、抗癌等多方面生物活性,常作为药效学指标进行定
性与定量分析リ。总黄酮含量作为质量控制指标,常采用可见分光光度法测定。应用较厂广的有NaNO2
Al(NO3)3-NaOH法和 ACI3-KAc法23,前者是基于具有3-羟基、4-羰基或5-羟基、4-羰基或邻二酚羟
基的黄酮类化合物与NaNO2和Al(NO3)3可形成配合物、并在碱性条件下进一步重排成红色产物,在
510mm处有最大吸收2…;后者是依据具有3-经基、4-羰基或5-羟基、4-羰基的黄酮与AIP“形成配合物
使吸收峰红移的性质,测定总黄酮含量。文献[6]报道,应用NaNO2-AI(NO3)3-NaOH法检测槲皮素时
在510nm处无最大吸收。本研究组在分析一些含黄中药,如侧柏、天南星( Rhizoma Arisaematis)时,
均未见有与上述两种方法相应的现象产生。
目前,尚未见有关总黄酮可见分光光度测定法适用性的研究报道,为此,本研究以黄酮类化合物芹
菜素及苷、槲皮素及苷等为研究对象,比较了不同显色法的适用性,同时依据黄在碱性介质中紫外可
见光谱红移的性质,以天南星为研究对象,进行了总黄酮含量测定方法的研究,弥补了现有方法的不足。
2实验部分
2.1仪器与试剂
UV-2401分光光度计(日本岛津公司);UV-752分光光度计(上海分析化学仪器公司)。
芹菜素与杨梅素对照品(>98.5%,上海融禾医药科技有限公司);夏佛托苷和异夏佛托苷对照品
(>98.5%,自制)。其它对照品均购于中国生物制品检定所,均配制成1g/L溶液备用;试剂均为分析纯。
天南星药材,产地分别为东北、江苏、安徴和四川,经南京中医药大学药植鉴定专家王春根、谈献和
等教授鉴定为天南星药典品种。
2.2实验方法
2.2,1NaNO2-AI(NO3)3-NaOH法取适量对照品溶液于10mL容量瓶中,加60%乙醇至5mL,加
5%NaNO2溶液0.3mL,摇匀,反应6min,加10%AI(NO2)3溶液0.3mL,摇匀,反应6min,加
1moI/L.NaOH溶液4.0mL,用蒸馏水稀释至刻度,摇匀,10min后以试剂空白作参比,在200~
2009-1104收稿;2009-12-24接受
本文系国家药典委员会资助项(No.Yz-l33)
E-mailyuchi@njutcm.edu.cn
分析化学
第38卷
650nm进行扫描分析。
2.2.2AICl3-KAc法取适量对照品溶液于10mL容量瓶中,加0.1 mol/L AIC3溶液2mL,lmol/L
KAc溶液3mL,用60%乙醇定容,摇匀,以试剂空白为参比,在200~650nm进行扫描分析。
2.2.3TEA法取适量对照品溶液于10mL容量瓶中,加60%乙醇至5mL,以1%三乙胺(TEA)定
容,摇匀,以试剂空白为参比,在200~650nm进行扫描分析。
2.2.4天南星总黄酮含量测定法准确称定药材粉末约0.6g,置具塞锥形瓶中,加60%乙醇50mL,
密塞,称重,超声提取45min,放冷,称重,用60%乙醇补足减失重量,摇匀,过滤。准确量取滤液5mL
于10mL容量瓶中,以1%三乙胺溶液定容,摇匀,按《中国药典》2005版一部附录VA紫外-可见分光光
度法,以试剂空白为参比,在400nm波长处测定吸光度。
3结果与讨论
3.1现有方法的适用性分析
以NaNO2-A(NO3)3~NaOH法分析了12种对照品(终浓度均为50mg/L),光谱见图1A(10~12对
照品的光谱图一致,故仅列10,下同),结果显示,仅芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷在510mm处有最
大吸收,其余均未显示此现象
以AIC12-KAc法分析12种对照品,光谱见图1B(终浓度均为50mg/L),结果显示,芹菜素及苷未有
位移,其余对照品的最大吸收均可位移至400mm以上,但位移值有所不同
分析12种黄酮类化合物的结构,均具有3-羟基、4-羰基或5羟基、4-羰基或邻二酚羟基,本实验结
果与测定总黄酮方法的有关原理相矛盾,具有5-羟基、4-羰基结构的芹菜素及苷在两种方法中均未产生
相应的现象。
3.2三乙胺法的建立
芹菜素在不同酸度的溶液中的紫外可见光谱显示,在pH>10的溶液中最大吸收红移,比较了NH3
?H20,TEA,NaOH等体系,以TEA体系最为方便和稳定。以TEA法对12个黄酮成分进行分析,光谱
见图1C(对照品终浓度分别在10~20mg/I)。结果显示:黄酮及苷和3-黄酮醇苷的最大吸收峰均位移
至400m处,但黄酮醇苷元的现象不ー。
2.0
C
A1,0
0
0.
0.0
0.
250350450550650
250350450550650
250350450550650
Wavelength(nm)
Wavelength(nm
Wavelength(nm)
图1对照品显色溶液的紫外可见光谱图
Fig. 1 Uv-vis spectra of reference substance after reaction
A.NaNO2-AI(NO3)3~ NAOH method;B.AIC13- KAC method;C三乙胺法( Triethmarnine, TEA retro)。1.芦丁( Rution);2.金
丝桃苷( Hyperoside);3.异槲皮苷( Isoquercitrin);4.槲皮苷( quercitrin):5.杨梅素( Myricetin);.槲皮素( Quercetin);7.木
犀草素( Luteolin);8.异鼠李素( Isorhamnetin);9.山萘素( Kaempferol):10.芹菜素( Apigenin);1].夏佛托苷( Schaftoside);
12.异夏佛托苷( Isoschaftoside)。
釆用超高效液相二极管阵列-电喷雾/四极杆-飞行时间串联质谱分