GB 15699-1995 烟草种子霜霉病检疫规程.pdf

中华人民共和国国家标准
GB15699-1995
烟草种子霜霉病检疫规程
Rules for tobacco seed (blue mold ) quarantine
1主题内容与适用范剧
本标准规定了烟草种子检疫对象、程序和方法。
本标准适用于各种入境烟草种子的检疫。
2术语
2.1检疫:为预防危险性烟草病虫害传播蔓延釆取的一种揩施。
2.2烟草霜霉病 tobacco blue mold
Peronos pora tabacina Adam和 Peronos pora nicotianae Speg,异名 Peronos pora hyos ymi f.sか
abasia.又称蓝霉病,是烟草上一种毁灭性病害。现已蔓延至欧洲、美洲、澳洲,目前我国尚无该病发
生,因此做为对外检疫对象。
3检疫程序
3.1取样
对一批种子总件数按比例抽査取样。在取样时,按对角线五点、棋盘式或分层取样,每点取样10~
20g(对旅客携带和国际邮包部寄的少量烟草种子,取样多少视具体情况而定)。取样要尽量做到有代表
性,将取的各点样品均匀抽取平均样品
3.2孢子囊和孢子梗检疫
2.1检验方法
洗涤检验法。
2.2原理
利用振荡的方法,使粘附在种子上的分生孢子和分生孢子梗分散到水中。
3.2.3仪器设备
离心机、显微镜、载玻片、振荡器、三角瓶
3.2.4试剂
蒸馏水
3.2.5步骤
取烟种5g,放入三角瓶中,加一定量蒸馏水浸泡0.5h后,再加蒸馏水剧烈振荡5min(也可放在振
荡器上振荡)。将洗液注入离心管,以1000r/min的速度离心5min,倾去大部分上清液,毎个离心管再
加入少量蒸馏水,使沉淀重新悬浮,取悬浮液制片,用400~500倍显微镜检査,每个载玻片査10个祝野
(见图1),每个样品检査5~10个载玻片,检查有无树枝状孢子囊梗和对生的孢子囊,孢子大约(13~
18)gmX⊥6gm×29gm。
国家技术监督局1995-08-28批准
996-03-01实施
GB15699-1995
图110个视野在载玻片上的分布
烟草緖病茵的分生孢子梗和分生孢子切片,见图2
图2烟草霜霽病菌的分生孢子梗和分生孢子切片
3.3卵孢子检验
3.3.1检验方法
乳聆油透明法。
3.3.2原理
乳酚油加萃胺蓝是真茵标准的浮载劑。胺蓝是破性染料,可染真藯的原生质,而不染细胞壁,因此
可以分辨清楚很难看淆的真?孢子。
3.3.3仪器设备
显微镜、烧杯、电炉、水浴锅。
3.3.4试剂
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GB15699-1995
苯胺蓝、苯酚、甘油、乳酚油、蒸馏水。
3.3.5步骤
取混合样品烟草种子5g,置于烧杯中用乳酚油煮沸15~30min,煮至烟草种子透明,但尚不至于
消解为止。加苯胺蓝(棉蓝)染色后用乳酚油作浮载剂,然后镜检。每个样品查20个载玻片【乳酚油的配
方:苯酚结晶(水浴加热溶化)20mL,乳酸20mL,甘油40mL,蒸馏水20mL]。
3.3.6检验结果的统计
统计孢子数量时,用血球计数器,观察80个小格,用其平均数×400000就是每毫升悬浮液孢子
的数量。
3.4种子检验
3.4.1检验方法
萌芽检验
3.4.2仪器设备及试剂
灭茵锅、温箱、培养皿、滤纸、次氯酸钠、无菌水
3.4.3步骤
取混合样品种子100粒,重复4次。取直径10cm的无菌柏氏培养皿或塑料培养皿4个,每个培养
皿放入三层吸足无菌水的吸水纸,将100粒种子均匀排列在吸足水的纸上,謐上培养皿,保持湿度。然后
放入15~20℃温箱内培养,经4~7d观察幼苗上是否有烟草霜霉病菌浸染的迹象。若检査种子内部是
否有病菌时,则将种子浸入1%次氯酸钠溶液10min,然后置于无菌滤纸上,培养检查
3.4.4检査结果的统计
单皿发病率和平均发病率按式(1)、(2)计算:
单皿发病率(%)=发病种子数
……(1)
平均发病率(%)=
供试发病种子总
………(2)
4X100
3.5分离培养检验
3.5.1检验方法
琼脂培养检验。
3.5.2步骤
用适于植物水培的营养盐类2.5g,琼脂14g,蒸馏水1000mL。用300mL的大口三角瓶,每瓶盛
培养基80mL,用棉塞塞好,消毒后将培养基做成斜面。培养基凝固后,用表面消毒过的种子,在培养基
斜面上毎瓶加0.01g置于15~20下,种子发芽后,观察幼苗是否有烟草霜霉病菌侵染的迹象。
3.5.3结果统计
统计感染霜霉病的百分比,统计方法同3.4.
3.6隔离试种
3.6.1报检
引种入境之前,引种人应持引种审批单,出口国的检疫证书,贸易合同,向入境的口岸植检机关报检
(包括非正规渠道来的种子)。
3.6.2供检材料登记
供检材料由引种人(单位)送到隔离检疫圃,交检疫收件人登记。
3.6.3初检
由检疫人员在初检室对送检材料进行初步检查。
3.6.4检疫圃试种
初检合格,可以进入检疫圃的供检材料,在检疫温室用消毒过的土和盆进行育苗盆栽。
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