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食品添加剂 番茄红素合成 生产工艺 由用于食品的其他类胡萝卜素生产中常用的合成中间体,经过维蒂希聚合反应制备而成的合成番茄红素。商业上用于食品的配方型番茄红素制剂,是将其配制成悬浮于食用油中的乳液或水溶型的粉末。 性状 番茄红素晶体为红色,几乎不溶于水,溶于氯仿等有机溶剂,对热、光、空气和湿度均敏感,容易氧化。 项 目 指 标 检验方法  番茄红素含量, 总番茄红素  96 附录A中A.1   全-反式- 番茄红素  70   干燥失重,  0.5 GB 5009.3减压干燥法  铅Pb,mgkg  1 GB 5009.12  阿朴-12-番茄红素醛,  0.15 附录A中A.2  三苯基氧膦TPPO,  0.01 附录A中A.3  技术要求  检验方法 总番茄红素含量和全-反式-番茄红素的含量的测定 方法原理 用高效液相色谱法在下列条件下测定总番茄红素含量和全-反式-番茄红素的含量 试剂和材料注意:所有溶剂均应为色谱级 A.1.2.1 正己烷。 A.1.2.2 用0.025特丁基对苯二酚BHT稳定的四氢呋喃。 A.1.2.3 n-乙基-二异丙胺。 A.1.2.4 番茄红素标准品纯度95。 仪器和设备 A.1.3.1紫外可见分光光度计,配备1cm吸收池。 A.1.3.2 高效液相色谱系统,配备合适的泵、进样器、色谱柱恒温箱和积分仪。 A.1.3.3 色谱柱:2根相连的不锈钢柱250x4.0 mm。 A.1.3.4 固定相:Nucleosil 300-5,5m A.1.3.5 HPLC条件 流速: 0.8 mLmin 进样量: 20 μL 柱温: 20 检测波长: 470 nm 流动相: 0.15 n-乙基-二异丙胺的正己烷溶液VV A.1.3.6 HPLC测定用标准溶液: 精密称取番茄红素标准品5.5-6.5mg,置100mL量瓶中,加入特丁基对苯二酚BHT稳定的四氢呋喃5ml使溶解,用正己烷稀释至刻度。作为HPLC测定用标准品溶液。 A.1.3.7 分光光度测定用标准溶液: 精密量取上述HPLC测定用标准溶液5.0mL,置100mL量瓶中,用正己烷稀释至刻度。作为分光光度测定用标准溶液。 A.1.3.8 样品溶液 精密称取本品4.5-5.5mg,置100mL量瓶中,加入特丁基对苯二酚BHT稳定的四氢呋喃5mL使溶解,用正己烷稀释至刻度。 分析步骤与结果计算 A.1.4.1 分光光度法测定番茄红素: A.1.4.1.1 分析步骤 用1cm吸收池,以正己烷为空白,在最大吸收波长处大约470nm测定上述分光光度测定用标准溶液的吸收值。 A.1.4.1.2 结果计算:
A.1 式中: Cst分光光度测定用标准溶液中番茄红素的浓度mgL; A最大吸收波长处的吸收度; 3450全-反式-番茄红素在正己烷中的吸收系数A
; 10000稀释系数。 A.1.4.2 HPLC分析测定: A.1.4.2.1 分析步骤 重复进样20LHPLC测定用标准溶液,记录测定出的番茄红素异构体的总峰面积除去溶剂峰,从重复进样中计算峰面积平均值,并按下式计算番茄红素响应因子RF:
A.2 式中: RF番茄红素的响应因子AU x Lmg; Ast番茄红素总峰面积的平均值AU; Cst分光光度测定用标准溶液中番茄红素的浓度mgL; 20由分光光度测定用标准溶液制备HPLC测定用标准溶液的稀释系数; 取样品溶液进样,并记录所有番茄红素异构体的峰面积。 A.1.4.2.2 结果计算 保留时间: 番茄红素异构体 相对保留时间 绝对保留时间约  13-顺式-番茄红素 9-顺式-番茄红素 全-反式-番茄红素 5-顺式-番茄红素 0.6 0.8 1.0 1.1 14min 19min 22min 24min  相对于全-反式-番茄红素 按下式计算总番茄红素的含量: 总番茄红素 AtransA5cisA9cisA13cisAxcis 0.1 100 A.3 RF Ws 式中: Atrans全-反式-番茄红素峰面积AU; A5cis,A9cis,和A13cis5顺式-,9顺式-和13顺式-番茄红素的峰面积AU; Axcis如检测到其它顺式异构体的峰面积AU; 0.1样品溶解的体积L; RF番茄红素的响应因子AUxlmg; Ws样品取样量mg。 按下式计算全-反式-番茄红素的含量: 全-反式-番茄红素 Atrans 0.1 100 RFWs 阿朴-12-番茄红素醛的测定 方法原理 高效液相色谱法 试剂注意:所有溶剂均应为色谱级 A.2.2.1 正己烷。 A.2.2.2 三乙胺TEA。 A.2.2.3 四氢呋喃THF。 A.2.2.4 用特丁基对苯二酚BHT稳定的甲苯0.5g特丁基对苯二酚BHT溶于1000mL甲苯中。 A.2.2.5 阿朴-12-番茄红素醛也叫番茄红素C25-醛标准品。 仪器和设备 A.2.3.1 高效液相色谱系统,配备合适的泵、进样器和积分仪 A.2.3.2 色谱柱:不锈钢柱200x4.0mm A.2.3.3 固定相:硅胶 Nucleosil Si 100 3m A.2.3.4 检测器:紫外可见分光光度计,或可见分光光度计 A.2.3.5 HPLC条件: 流速: 2.0 mLmin 进样量: 5.0 L 检测波长:435nm 流动相: A-正己烷 B-正己烷:三乙胺99.9:0.1VV C-正己烷:四氢呋喃80:20VV 梯度: 时间,分钟 A B C  0 80 20 0  16 60 20 20  22 40 20 40  24.5 80 20 0  A.2.3.6 标准品溶液 精密称取阿朴-12-番茄红素醛对照品14.5-15.5mg,置50mL量瓶中,用特丁基对苯二酚BHT稳定的甲苯溶解并稀释至刻度。精密量取2mL,置100mL量瓶中,用特丁基对苯二酚BHT稳定的甲苯稀释至刻度。 A.2.3.7 样品溶液 精密称取本品29.0-31.0mg,置10mL量瓶中,用特丁基对苯二酚BHT稳定的甲苯溶解并稀释至刻度,将该溶液超声处理10min。 结果 阿朴-12-番茄红素醛的保留时间约为14min,其相对于全-反式-番茄红素的相对保留时间为1.6。 计算: 阿朴-12-番茄红素醛 AsWst10 100A.4 AstWs2500 式中: As样品峰面积; Ast标准品峰面积; Wst标准品取样量mg; Ws样品取样量mg; 10样品溶解的体积ml; 2500对照品溶解体积50mL乘以稀释倍数50。 三苯基氧膦TPPO的测定 方法原理 在下列条件下用HPLC方法检测。 试剂 A.3.2.1正己烷。 A.3.2.2异丙醇。 A.3.2.3 四氢呋喃THF。 A.3.2.4三苯基氧膦 TPPO纯度99 注意:所有试剂均应是色谱级。 仪器和设备 A.3.3.1 高效液相色谱系统,配备合适的泵、进样器和积分仪。 A.3.3.2色谱柱:不锈钢柱1504.6mm。 A.3.3.3固定相:硅胶基柱 Supelcosil Lc-Si, 5μm 或类似的柱。 A.3.3.4检测器:紫外检测器。 A.3.3.5 HPLC条件: 柱温: 20。 流动相:异丙醇:正己烷1:24 VV。 流速:1.5mLmin。 进样量:50μL。 检测波长:210nm。 TPPO的保留时间大约为8.1min。 分析步骤 标准溶液:精密称取10mg的TPPO标准品,用THF四氢呋喃溶解,定量移入1000mL容量瓶中,用四氢呋喃稀释至刻度。 样品溶液:精密称取1000mg的样品,用四氢呋喃溶解,定量移入100mL容量瓶中,用四氢呋喃稀释至刻度。 结果计算
.A.5 式中: As样品峰面积 ; Ast标准峰面积; PstTPPO标准品的纯度的比例例如:如果标准物质的纯度为99,该数值应为0.99; Wst标准品的重量mg; Ws样品重量mg。