GB 2905一82 谷类、豆类作物种子粗蛋白质测定法.pdf

中华人民共和国国家标准
UDC633.1/.8
谷类、豆类作物种子粗蛋白质测定法
543.85.06
GB2905-82
(半微量凯氏法)
Method for determination of crude protein
in cereals and beans seeds
(semi-micro kieldahl method)
1适用范
本标准适用于测定谷类、豆类作物种子租蛋白质含量。
2仪器、设备
分析天平:感量0.0001克。
2.2实验室用粉碎机。
2.3半微量凯氏蒸馏装置(推荐使用龙科-A型半微量蒸馏装置
半微量滴定管;容积10毫升
2.8硬质凯氏烧瓶:容积25毫升,50毫升。
2.6锥形瓶:容积150毫升。
2.7电炉:600瓦。
3试剂
3.1盐酸(GB622-77)或硫酸(GB625一77)。分析纯。0.02N、0.05N标准溶液(邻苯二甲
酸氢钾法标定)。
3.2氢氧化钠(GB629-77):エ业用或化学纯。40%溶液(W/V)。
3.3硼酸一指示剂泥合液。
3.3.1硼酸(GB628-78):分析纯。2%溶液(W/V)。
3.3.2混合指示剂:溴甲酚绿(HG3-122-79)0.5克,甲基红(HG3-958-76)0.1克,分
別溶于95%乙醇中,混合后稀释至100毫升。将混合指示剂与2%硼酸溶液按1:100比例混合,用稀
酸或碱调节pH值为4,5,使呈灰紫色。即为硼酸一指示剂混合液。
注:此洛液放置时间不宜过长,酷在一个月之内使用
加速剂:五水合硫酸铜(GB665~78)分析纯,10克,疏酸钾(HG3-920-76)分析纯,
100克,在研钵中研磨,仔细混匀,过40目筛
3.5浓硫酸(GB625一77)比重1,84,无氮。
3.630%过氧化氢(HG3-1082-77):分析纯。
3.730%过氧化氢一硫酸混合液(简称混液):30%过氧化氢、硫酸、水的比例为3:2:1,即在
100毫升蒸馏水中慢慢加入200毫升浓硫酸,待冷却后,将其加人300毫升30%过氧化氢,混匀。
注:此混液可一次配制500~10毫升贮藏于试剂瓶中备用。夏天最好放入冰箱或荫凉处贮藏,室温(20C)上
下时不必冷藏,贮藏时间不超过一个月。
3.8糖(HG3-1001-76):分析纯。
国家标准总局1982-02-27发布
1983-01-01实施
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GB2905-82
试样的选取和制备
4.1选取有代表性的种子(帯壳种手需脱売)挑拣干净,按四分法缩减取样,取样量不得少于20克。
4,2将种∫放于60~65C烘箱中千燥8小时以上,用粉碎机磨碎,95%通过40目筛,装人磨口瓶备
用
5测定步骤
5.1称样称取0.1克试样两份(含氮1~7毫克),准确至0.001克,同时测定试样的水分含量
5.2消煮
5.2.1将试样置于25毫升凯氏瓶中,加人加速剂粉末。除水稻为1克外,其他购为2克。然后加3
毫升浓硫酸,轻轻摇动凯氏瓶,使试样被硫酸湿润,将凯氏瓶侦斜置于电炉上加热,开始小火,待泡
沫停止后加大火力,*保持凯氏瓶中的液体连续沸腾,沸酸在瓶颂中部冷凝回流。待溶液消煮到无微小
的磯粒并埊透明的蓝绿色时,谷类继续消煮30分钟,豆类继续消煮60分钟。
5.2.2将试样置于50亳开凱氏瓶中,加入0.5克加速剂和3毫升混液,在凯氏瓶上放一曲颂小漏斗、
倾斜置于电炉上加热,井始小火(用调压器将电压控制在175伏左右),保持凯氏瓶中液体呈微沸状态。
5分钟后加大火力(将电压控制在200伏左右),保持凯氏瓶中的液体连续沸腾。消煮总时间,水稻、高梁为
30分钟,其他均为45分钟。
注:采用5.2.1或5,2.2消煮,其准确度与精密度一致,可任取一种。
5.3蒸馏、消煮液稍冷后加少量蒸馏水,轻振摇匀。移人半微量蒸馏装置的反应室中,用适量蒸留
水冲洗凯氏瓶4~5次。蒸馏时将冷凝管末端插到盛有10亳升硼酸一指示剂視合液的雊形瓶中,向反
应室中加入40%氢氧化钠溶液15毫升*,然后通蒸气蒸馏,当馏出液体积约达50毫升时,降下锥形
瓶,使冷凝管末端离开液面,继续蒸留1~2分钟,用蒸馏水冲洗冷凝管未端,洗液需流入锥形瓶
5.4滴定谷类以0.02N,豆类以0,05N盐酸或碗酸标准溶液滴定至锥形瓶内的溶液由蓝绿色变
成灰紫色为终点。
5.5空白用0.1克蔗糖代替样品作空白测定。消耗酸标准溶液的体积不得超过0.3毫升
6测定结果的计算
6.1计算公式
(V-1)×V×0.0140×K×100
粗蛋白质,%(于基)
×(100-X
×100
式中:z一滴定试祥时消耗酸标准溶液的体积(毫升)
Vー滴定空白时消耗酸标准溶液的体积(毫升)
N酸标准溶液的当量浓度,N
K一一氮换算成粗蛋白质的系数
试样重量(克)↓
X一试样水分含量;
0.0140-一每毫克当量氮的克数
6.2平行测定的结果用算术平均值表示,保留小数后二位。
6.3测定两类作物种子粗蛋白质的平行测定结果为15%以下时,其相对相差不得大于3%:15%~30%
时为2%;30%以上时为1%。
6,4结粜报告中必须注明氮换算成粗蛋白质的系数。换算系数见下表。
应加热有硫酸部位的瓶底,不使瓶壁的温度过高,以免铵盐受热分解造成氮的损失
*来用消煮条件5.2.2时加10毫升即可。