建立海水致病菌快速检测新方法.pdf

第42卷
分析化学( (FENXI HUAXUE)NEWS
第11期
2014年11月
Chinese Journal of Analytical Chemistry
1715
NEWS
稳
定同位素标记-液相色谱-质谱联用技术被广泛应用于代谢组学研究中,它克服了部分化合物内标获取困难的问题,
可以实现对非目标性代谢物的定性和定量分析
武汉大学化学与分子科学学院冯钰锜和袁必锋等将稳定同位素标记与母离子扫描方法结合,建立了一种稳定同位
素标记-双母离子扫描-质谱分析(IL-LC-DPlS-MS)的方法用于非目标巯基类化合物分析。该工作合成了衍生化试剂,溴
化-溴代丙酮基喹啉铵(o- bromoacetonylquinolinium bromide,BQB)与相应的同位素标记试剂(BQB-d1),用于衍生巯基化
合物。BQB与BQB-d,标记的行生化产物除了可以提高巯基化合物的质谱响应外,还分别产生m/z218和m/2225的特
征子离子;因此,可利用双母离子扫描模式对巯基化合物进行定性和定量分析。具体方法为:分析样本平均分成两份,分
別用BQB和BQB-d1術生,衍生化产物1:1混合后进行LC-DPIS-MS分析。利用双母离子扫描模式(m/z218和225),分
别采集BQB和BQB-d,标记的衍生化产物的质谱信号,该方法有效的避免了质谱信号波动对化合物的分析以及轻/重标
记信号的相互干扰。在两张质谱图中抽提保留时问和信号强度一致并含有特定分子量差异(nx7Da)的离子对为可能
的巯基化合物。与全扫描模式相比,母离子扫描具有更高的选择性,可以特异性的监测只产生特定子离子的母离子,显
著的降低了质谱的背景干扰,进而提高了方法的灵敏度和对目标化合物定性的准确性。通过该方法,在啤酒和尿液中分
别发现21和103个巯基化合物,并结合二级质谱和高分辦率质谱分析对部分化合物进行了进一步确认。此外,该方法
还成功应用于巯基化合物的相对定量和绝对定量分析。I-IC-DPIS-MS方法也可以推广应用到其它含有相同官能团的
代谢物定性和定量分析(Anal.Chem.,2014,DOI:10.1021/ac5023315)。
DPIS
Light labelling
03
mz218
Heavy labelli
1: 1 mix aa na
Q1 Q2(Collision cell)Q3
IS m 218
S/MS
1.5×104
Candidates
051015202530
TOF-MS
PIS m/z 225
1.5×]0
1.5×10°
1.5×10)
051015202530
(min)
IL-LC-DPIS-MS分析方法的基本流程
海
水中的致病菌包括来自生活污水、城市径流以及海岸沙滩流入的陆源性致病菌及自然海水中致病菌,不仅威胁人
们的健康安全,而且会对水产养殖业带来巨大的危害和损失。因此,发展快速、准确、高灵敏检测海水中主要致病
菌的传感器技术受到了广泛关注。目前,中国科学院烟台海岸带研究所海洋环境电化学与传感器技术研究团队与海岸
带微型生物生态与应用团队合作,研制了一种免标记、免固定化电位型传感器,用于海水致病菌的检测。相关研究成果
近日发表于 Anal. Chem,,2014,86(19):9412-9416。
Bacteriun
Protamine v\
Control
Protamine
8.?
Time
该检测系统以核酸适体作为识别分子,鱼精蛋白作为指示离子,避免了对核酸适体的标记和固定化,从而实现了对
致病菌的快速、高效、低成本检测。海水高盐度能够降低核酸适体和靶致病菌的结合能力,并会干扰聚离子选择性电极
的电位响应。在实际样品分析中,研究人员采用了样品在线快速过滤法,有效消除海水基体效应,并通过致病菌富集提
高了检测灵敏度,满足了实际海水检测的要求。