GB 15193.14-1994 致畸试验.pdf

中华人民共和国国家标准
GB15193.14-9
致畸试验
Teratogenicity test
1主题内客与适用范
本标准规定了预测环境有害物质对人体产生胚胎毒性及致暶性实验方法
本标准适用子在我国生产和销售的一切食品原料及食品用产品的致喷性评价。如新资源食品、食品
添加剂、食品用包装材料及洗涤消毒剂等。
2原理
母体在孕期受到可通过胎盘屏障的某种有害物质作用,影响胚胎的器官分化与发育,导致结构和机
能的缺陷,出斑胎儿畸形。因此,在受孕动物的胚胎着床后,并已开始进入细胞及器官分化期时投与受试
物,可检出该物质对賸鼡的致蹰作用。
试剂及其配制
实验用水为蔡馏水
3.1甲醛、冰乙酸、2,4,6-三硝基酚、氢氧化钾、甘油、水合氯醛、茜素红。
3.2茜素红贮备液:茜素红-S,50%乙酸饱和液5.0mL,甘油10.0mL,1%水合氯醛溶液60.0mL混
合,放入棕色瓶中。
3.3茜素红应用液:取贮备液3~5mL,用1~2g/100mL氯氧化钾液稀释至10mL,存于棕色瓶
中
3.4透明液A:甘油200mL、氢氧化钾10g,蒸水?90mL混合。
3.5透明液B:甘油与蒸馏水等量混
3.6固定液: Bouins液:2,4,6-三硝基酚75份、甲醛20份、冰乙酸5份。
4仪器与设备
4.1实验室常用设备。
4.2生物显徽鏡及体视显微。
4.3游标卡尺(百分尺)。
实验动物
常用试验动物为大鼠、小鼠和家兔。传统致畸应选健康性成熟(90~100d)雌、雄大鼠,雌性应为未
交配过的大鼠80~90只,雄鼠减半。
6量分组
至少设四个组,一个空白对照,3个试验组。剂量原则上可采用1/4、1/16、1/641LDso,或以亚急性毒
中华人民共和国卫生部1994-08-10批准
1994-08-10实施
GB15193.14-94
性试验的最大元作用剂量为高剂量组,其1/30左右为低剂量组、在其间设一组。对某种新的动物,初次
试验可设一阳性对照组。每组至少12只孕鼠
常用阳性对照物有敌枯双(0.5~1.0mg/kg体重)、五氯酚钠(30mg/kg体重)、阿斯匹林(250
300mg/kg体重)及维生素A25000~40000IU等。
7操作步骤
7.1“受孕动物”的检查和给受试物时间
性成熟雌、雄大鼠按1:1(或2:1)同笼后,每日早晨观察阴栓(或阴道涂片),查出阴栓《或精子),
认为该鼠已交配,当日作为“受孕”零天。如果5d内未交配,应更换雄鼠。检出的“孕鼠”随机分到各组,
并称重和编号,在受孕的第7~16d,每天经口给予受试物(按0.5~1.0mL/100g体重计)。受孕的0、
7、12、16、20d称体重,并计算给受试物的量
动物交配期室温在20~25℃为宜,环境安静,必要时给予增加麦芽和蛋糕等营养物质。
7.2孕鼠处死和检查
大鼠于妊娠第20d,小鼠第18d,兔第29d处死。大鼠用2g/100mL碗喷妥钠1~1.5nL/只腹腔
注射,麻醉或直接断头。剖腹取出子宫称重、记录并检查胚胎、着床数、早期吸收胎,迟死胎及活胎数。
7.3活胎鼠检査
逐一记录胎仔体重、体长、检査胎鼠外观有无异常,如头部有元脑膨出、露脑、小头、小耳、小眼、无眼
和睁眼、兔唇、下颌裂,躯千部有无腹壁裂、脐疝、脊柱弯曲,四肢有无小肢、短肢、并趾、多趾、无趾等畸
形,尾部有无短尾、卷尾、无尾,肛门有无闭锁
7.4胎鼠骨标本的制作与检査
将每窝1/2的活胎(奇数或偶数)放入95%(V/V)乙醇中固定2~3周,取出胎仔(或可去皮、去内
脏及脂肪)流水冲洗数分钟后放入1~28/100mL的氢氧化钾溶液内(至少5倍于胎仔体积)8~72h
透明后放入茜素红-S应用液中染色6~48h,并轻摇1~2次/A,至头骨染红为宜。再放入透明液A中1
2d,放入透明液B中2~3d,待骨骼染红而软组织基本褪色,将标本放入小平皿中,用透射光源,在体
视显徴镜下作整体观察,然后逐步检査骨骼。测量囟门大小、矢状缝的宽度、头顶间骨及后头骨缺损情
况,然后检査胸骨的数目,缺失或融合(胸骨为6个,骨化不全时首先缺第5胸骨、次为缺第2胸骨)。肋
骨通常12~13对,常见畸形有融合肋、分叉肋、波状肋、短肋、多肋、缺肋、肋骨中断。脊柱发育和椎体数
目(颈椎7个,胸椎12~13个,腰椎5~6个,底椎4个,尾椎3~5个)有无融合、纵裂等。最后检查四肢
骨
7.5胎鼠内脏检查
每窝的1/2胎鼠放入 Bouins液中,固定两周后作内脏检查。先用自来水冲去固定液,将鼠仰放在石
蜡板上,剪去四肢和尾,用刀片从头部到尾部逐段横切或纵切。按不同部位的断面观察器官的大小、形状
和相对位置。正常切面见图。
正常切面图
a.经口从舌与两口角向枕部横切(切面1),可观察大脑、间脑、正脑、舌及颚裂。