LAMP结合基因芯片技术在快速检测嗜肺军团菌中的应用.pdf

实用医学杂志2013年第29卷第14期
2383
检验与临床
LAMP结合基因芯片技术在快速检测嗜肺军团菌中的
应用
杨俊发许飞
摘要目的:开发一种可以快速、准确检測嗜肺军团菌的检测方法。方法:采用环介导等温核酸扩增技
术(lo0p- mediated isothermal amplification,LAMP)对嗜肺军团菌的特异性DNA保守片段和其他对照菌种DNA
进行扩增,将扩增的DNA与基因芯片进行杂交,观察是否可在芯片相应的区域出现杂交信号。结果:只有嗜
肺军团茵DNA经 LAMIP反应后出现特异性的扩増条带,与PCR扩增基因的最低稀释倍数10°相比,IAMP
最低稀释倍数可达107,反应的灵敏度比PCR高100倍左右,同时将经LAMP扩増后的基因与基因芯片杂
交,相应的喈肺军团菌区城可出现杂交信号。结论:LAMP技术结合基因芯片杂交技术具有灵敏度高,特异
性好,简便快速等优势,可提高检验鉴定結果的准确性。
关键词环介导等温核酸扩増技术;基因芯片;嗜肺军团菌;检测
A rapid detection of Legionella Pneumophila by LAMP in combination with gene chip YA NG Junfa, XU
Fei. Department of Respiration Medicine the First Affiliated Hospital of anchang University, Nanchang 330006
Abstract] Objective To establish a rapid and accurate method to detect the Legionella Pneumophila
(P). Methods The loop-mediated isothermal amplification( LAMP to amplify the specific DNA fragments of P
and the gene chip technology was further used to identify the LP sequence. Results The DNA bands corresponding to
LP DNA could be specifically amplified by the LAMP reaction. For normal PCR, the minimum dilution of genomic
DNA was 10-s, however, for the LAMP, the minimum dilution of genomic DNA was up to 10", so the sensitivity of
the IA MP reaction is about 100 times higher than of normal PCR. The combination of the LAMP and gene chip
contributed to demonstrating the specific LP sequence signal. Conclusion Combination of AMP and gene chip
is a simple, accutate and rapid technology to detect LP with, high sensitivity and specificity
(Key words] LAMP; Gene chip; Legionella Pneumophila; Detection
嗜肺军团菌是引起非典型肺部感染的主要致结合基因芯片杂交技术实现对病原体的检测,以
病菌之一,现已明确其至少存在十几种血清类型,求开发一种可以快速检测嗜肺军团菌的方法。
能够致病的有多种,其以呼吸道为主要感染途径,且
材料与方法
具有一定的传染性。及早明确嗜肺军团菌感染,对1.1菌种标准DNA来源嗜肺军团菌DNA获赠
临床医生制定诊治决策、指导针对性用药起重要作于北京基因组研究所,金黄色葡萄球菌、志贺氏
用,但现阶段对嗜肺军团菌的检测还是处于相对滯菌、普通变形杄菌、大肠杆菌、霍乱弧形菌、祜草杆
后的局面?,所以开发一种可以快速准确检测嗜肺菌、沙门氏菌DNA均购于北京美菜博医学科技有
军团菌的方法是临床检测工作中亟待解决的问题。限公司。
环介导等温核酸扩增技术具有简便、经济、1.2主要试剂、仪器试剂:2xU- LAMIP Mix、2x
灵敏度高及特异性好等优点,已被广泛应用于核酸 PCR Taqmix、 BSTDNA聚合酶,仪器:PCR仪、电泳
扩增领域。基因芯片杂交技术是一种新兴的高通仪、紫外成像系统、共聚焦激光扫描仪。
量技术,即在面积较小的载体上实现对多种目标1.3引物及探针的设计与合成引物及探针均由
基因的同时检测?。本研究拟采用LAMP技术对嗜上海生工生物工程有限公司合成。嗜肺军团菌的
肺军团菌的特异性的保守基因片段进行扩増,并LAMP特异引物序列见表1。
1.4芯片制备基因芯片由上海生物芯片国家工
doi:10.3969/ J.ssn.1006-5725.2013.14.057
程研究中心点制,见图1
作者单位:3300南昌大学医学院研究生部(杨俊发
1.5方法
33000南昌大学第一附属医院呼吸内科(许飞
1.5.1LAMP扩增向各PCR管(0.2mL)中加入: