离子色谱测定壳寡糖聚合度研究.pdf

第46卷第5期
化
技术与开发
2017年5月
Technology Development of Chemical Industry
Mav.2017
ay
验与分
离子色谱测定壳寡糖聚合度研究
邵波
浙江树人人学,浙汇:杭州310015
摘要:采用离子色谱方法研究売寡糖聚合度(DP)与其保留肉子(k)的相关关系。利用实验数据建立线性
阿归方程,并对样品中的未知売寡糖样品的聚合度进行分析,并改变流速和淋洗液的条件进行验让,误差≤1.97。因
此,可以利用离子色谱分离保留因子计算壳寡糖的聚合度。
关键词:壳寡糖;保留肉子;聚合度
中图分类号:)652.63
文献标识码:A
文章编号:1671-9905(201705-0035-03
近年来,壳寡糖逐渐应用于食品、医药、饲料、农瓶中定容,配成浓度为1.0mg?mL,'的储备液。使
业等各领域"。目前売寡糖产品检测中聚合度的分用液分別用超纯水稀释至10μg?m
析尤为关键,但是其检测的方法尚不成熟。常用检
壳寡糖样品溶液:称取壳簒糖样品1.0g,用超
测方法有液相色镨法、毛细管电泳法及费时的纯水溶解后定容至10mL,用0.45μm水性滤膜过
衍生荧光法。离子色谱积分脉冲安培检测法是报道滤,滤液作为储备液备用,使用时用超纯水稀释至
的检测糖类最好的方法?,但这些方法都需要使用10ug·mLle
标准品进行验证,壳寡糖的标准样品不但价格昂13色谱条件
贵,且供应商极少因而较难购全,这给壳寡糖聚合
度的验证带来很大的困难。根色谱中保留值规
色谱柱及檢测池温度20℃,进样量251
LD40A电化学檢测器配Au工作电极及Ag-Agl参
律,通过实验研究其聚合度与保留因子之间的关系
非常有意义,可以在缺乏标准品的情况下,对未知比电极,积分脉沖安培法检测
的壳寡糖进行聚合度的分析,以获得高活性壳寡糖
淋洗液1:A:100mol?T氢氧化钠:B:超纯水
0%A+80%B(VWの等度洗脱。
淋洗液2:A:100mol?L氢氧化钠;B:超纯水;
1材料与方法
10%A+90%B(W/り等度洗脱。
1仪器和试剂
2实验结果与讨论
戴安DX-600离子色谱仪:配电化学检测器分2.1売寡糖聚合度与保留因子的计算
析柱系统为 Carbopac. PA104mmx50m,保护柱为
取壳寡桾样品渀液适当稀释后进样分析,流速
Carbopacpa10 4mm x 250 mmc
2~売6糖标准物质(含量大于90%)。超纯
0.60mI?min,淋洗液:20%NVaO)H+80%H_O(WW
水(18.2M92)。壳寡糖试样
得到图1的色谱图。图1所示1~3号峰为未知聚合
度壳寡糖,4-8号峰则使用标准物质进行定性确证
1.2实验方法
分别为売6~売2糖。计算保留指数及相关参数见
売寡糖标准混合液:分别称取売2~売6糖的标表1
准物质各1000g用超纯水分別溶解于10mL容量
基金项目:浙江省分析测试科技计划项目(编号2015C37039)
作者简介:部波,女,硕士,高级实验师,主持省分析测试基金、省教育厅、杭州市科委课题,参与国家级省级课题多项,发表
论文30余第,其中核心刊物20余第,数第文章被SCI、CA收录
收稿日期:2017-03-06
万方数
化工技术与开发
第46卷
70.0
关关系。
2.2未知峰聚合度的计算
50.0
先由表1的数据建立聚合度为2~6的売寡糖对
照品的 logdp与lgk'"的相关关系。研究中发现,売
寡糖的保留值规律为:logk'=A1 logdp+B1,将3号未
10.0
知峰的log'值数据代入上述方程,计算其 log DP
20304050(008090100101010140值,并由此“ogDP"值计算其“DP"值及误差值。完
图1壳寡糖样品色谱图
成刈该未知峰的定性后,为避免误差,再以该未知峰
I'ig, 1 Chromatogram of Chitosan Oligosaccharide sample
为最高聚合度,顺序向下建立新的回归方程,直至完
根据气相色谱的碳数规律,同系物的调整保成所有未知峰的聚合度计算。由计算可知,该样品
留时问或保留因子(F)的对数与碳数存在线性关中1-3个未知峰分別对应聚合度为119、7的売寡糖
系:logk'=A1n+B1,式中,k为保留因子,A1为碳数2.3改变流速及淋洗条件的影响
规律常数,B1为常数,n为碳数值。直链壳募糖是
将流速改变为0.80mL?min',淋洗液10%
山氨基葡萄糖单体缩合而成的寡糖,其中的聚合度
aOH+90%HIO(W/り等度洗脱,分离后的各项参数
(DP)等同于碳数,但是由于链上有氨基,通过对売
见表3和表4。保留因子的对数与聚合度的对数之
寡糖聚合度DP与保留因子足相关关系进行回归
问的线性关系依然存在
发现聚合度DP与保留因了对数logk'具有指数相
表1売寡糖聚合度(DP)与保留因子(k)数据计算
Table 1 Data calculation of oligosaccharide polymerization degree(DP)and retention fator(')
峰号 Peak number分析物 analyte DP LOGDP t tn t'
7.015
0).477
1.6.54
0.502
8.848
5.349
0.728
四糖
9.020
7.366
糖
売六糖
0.778
7.15.3
木知物
6.714
未知物
0.405
未知物
1.654
5.247
3.593
2.172
0).3.37
注:表中DP为売糖聚合度,。为死时间(以水负峰出峰时间),n为各売寡耱的保留时间,r为各壳寡糖的调保留时问
k为保留因子,=rk:/a
表2聚合度及误差计算
Table 2 alculation of(P and deviation with 15%NAOH+85% 120(V/)clution
聚合度DP线性方程 regression equalions R未知峰lagk2'值 logk value of unknow peak logpp"DP”DP△/%
logk'=-0.7845 Sloop+1.0639(0.9996
().8366.8637-1.962
3~7logk=-(0.7889ogDP+1.06700.9993
0.405
0.9538.9819-0.207
logk=-0.8006 LOOP+1.07660.9996
0.3.37
1.0)4911.197111.793
注:ム=(“DP”ーDP)/DP×100%;“DP”:根据线性方程计算值
表3壳寡糖对照品聚合度DP与保留因子k数据计算
Iable 3 Data calculation of (P)and retention fator(k')
峰号 Peak number分析