在线净化液相色谱串联质谱法测定动物源食品中金刚烷胺的残留.pdf

第41卷
分析化学( FENXI HUAXUE)研究报告
第8期
2013年8月
Chinese Journal of Analytical Chemistry
1194~1198
DOI:10.3724/SP.J.1096.2013.30047
在线净化液相色谱串联质谱法
测定动物源食品中金刚烷胺的残留
艾连峰”马育松陈瑞春郭春海康占省
(河北出人境检验检疫局,石家庄.050051)
摘要建立了在线净化液相色谱串联质谱法测定动物源食品中金刚烷胺的残留。样品用甲醇-1%三.氯乙
酸或乙腈提取,提取液用阳离子交换在线净化柱( Cyclone MCX)净化,5%氨水-甲醇溶液将分析物洗脱转入至
Capcell Pak MG C1分析柱,经色谱分离后,用串联质谱检测。方法的定量限(IOQ)牛奶为0.25g/kg,动物组
织和鸡蛋为0.5g/kg,在0.1~20g/工L浓度范围内呈良好线性,线性相关系数大于0.995方法在3个水
平的添加回收率为83.3%~93.6%,相对标准偏差在3.5%~5.9%之间。方法简单快速,回收率高,重现性
好,适用于动物源食品中金刚烷胺残留的定量及确证分析。
关键词在线净化液相色谱串联质谱;金刚烷胺;残留;动物源食品
1引言
金刚烷胺是一种对称的三环状胺,可以抑制病毒穿人宿主细胞,并影响病毒的脱売,抑制其繁殖,在
临床上能有效预防和治疗各种A型流感病毒的感染,同时也是帕金森综合症的治疗药物。但金刚烷胺
对食用者可能产生嗜睡、失眠、眩晕、抑郁、恶心、食欲减退等多种不良反应,具有一定的毒副作用。而
且,长期使用金刚烷胺可以使病毒产生不同程度的耐药性,诱导产生新型耐药病毒。因此,我国农业部
发布了《关于清查金刚烷胺等抗病毒药物的紧急通知》,规定除经批准生产、使用的疫苗产品外,禁止使
用其它药物防治高致病性禽流感等一类病原微生物引起的病毒性疫病。但目前我国畜禽饲养中濫用金
刚烷胺现象严重,急需建立快速、灵敏、准确的动物源食品中金刚烷胺残留量的分析方法。
目前,检测金刚烷胺的方法有气相色谱质谱法(GC-MS)…2、液相色谱法(HPIC)3?和液相色谱
质谱法(IC-MS)-121,方法多应用于生物体液和医药中金刚烷胺的检测,而动物组织中金刚烷胺
残留的检测方法较少2。IC和CC-MS均需要复杂的行生处理过程,具有高选择性、高灵敏度特点的
LC-MS在金刚烷胺的检测具有一定的优势,但仍需要较好的前处理以降低LC-MS的基质效应,尤其是
对于复杂的动物组织样品。 Turboflow在线净化技术结合了扩散、化学和体积排除的原理,在捕获感兴
趣分析物的同时,快速净化样品;与串联质谱联用,在简化样品前处理的同时保证了方法的灵敏度,是近
年发展起来的一种新型联用检测技术,已在残留分析得到了较好的应用33。本研究采用该技术建立
了动物源食品中金刚烷胺残留的检测方法,方法简单、快速,回收率稳定、灵敏度高,能够对低浓度的金
刚烷胺进行定性与定量分析,已应用本实验室的日常检测工作。
2实验部分
2.1仪器与试剂
Turboflow在线净化液相色谱串联质谱仪(美国 Thermo Fisher公司),由CTC多功能自动进样器
(配有100L定量环)、两个耐压125kPa的四元梯度液相泵、六通切换装置、多元柱切换装置和TSQ
Quantum Ultra三重四极杆质谱仪组成。 Sigma3K-15型离心机(美国 Sigma公司),PI2100型均质器(瑞
士 Kinematica公司)。
甲酸、异丙醇、乙腈、丙酮和氨水为色谱纯,水经Mill-Q纯系统处理(美国 Millipore公司)。
2013-01-14收稿;2013-03-13接受
本文系国家质检总局科技计划项目(N。.2013IKI154)和河北检验检验局科研项目(No.HE2011K005)资助
xE-mailailianfeng(@126.com
第8期
艾连峰等:在线净化液相色谱串联质谱法測定动物源食品中金刚烷胶的残留
1195
盐酸金刚烷胺对照品,购于中国药品生物制品检定所。
2.2实验方法
2.2.1在线净化色谱条件在线净化程序主要为净化和分离过程,浄化过程(TFC)在上样泵驱动净化流
动相在 Turboflow柱完成,分离过程(HPLC)是洗脱泵驱动分析流动相在分析柱上完成,整个程序通过两个
六通阀切换实现流路的改变。TIFC的净化柱为 Cyclone-MCX柱(50mmx0.5m,60 um Particle size,60A
pore size),流动相A为10mmol/L乙酸铵-0.01%乙酸溶液、B为乙腈、C为丙酮-乙腈-异丙醇(3:3:3,
Vの)、D为5%氨水-甲醇溶液。进样量为50 ule HPLC的分析柱 Capcell Pak MG C18柱
(150mmx2.1m,5pm);流动相A为0.5%甲酸溶液,流动相B为乙腈,其在线净化程序见表1,其中
TFC在程序中每步的变化采用瞬变模式,HPLC每步的变化除最后一步采用瞬变模式外,其它步骤间改变
采用渐变模式。整个运行时间为8.5min,在5~7min切人质谱系统。程序中各步所用流路模式见图1。
表1 Uroflow在线净化梯度洗脱程序
Table I Gradient elution procedure of Turboflow on-line cleanup
步骤开始时间步骤时长
上样泵[ oading pump
洗脱 Eluting pump
ep
Step time
目的
流速
C
D
目的
流速
Function
Function
上样
条件化
Loading
2.0
转移
0.2
洗脱
0.595
淋洗
Cleaning
洗脱 Elution0.57525
淋洗
洗脱
0
淋洗
洗脱
Cleaning
2.0
109
Eu
lon
充满洗脱环
洗脱
Loop fillin
Elution
1.5
条件化
条件化
0,5
Turbofow column
Turboflow columnn
to Waste
Turboplow column to Waste
g pump
Loading pu
Loading pump
Eluting pump Transfer loop
Transfer loop
Eluting pury
ransfer loop
uang pul
Stcp1,4,5,7
Step 3, 6
图1在线净化流路切换模式示意图
Fig 1 Flow diagram of on-line cleanup modes
2.2.2质谱条件电喷雾离子源;多反应监测(MRM)正离子扫描模式;鞘气压力,40unit;辅助气压
力,30unit;离子源温度:200℃;电喷雾电压( Electrospray ionization,ESI):3500V;源内诱导解离电压
10V;毛细管温度:350℃;Q1,Q3单位分辨率:0.7U。MRM监测离子对的质荷比(m/