渤海湾肠道病毒的季节分布及其污染类型分析.pdf

第35卷第6期
海洋学报
2013年11月
ACTA OCEANOLOGICA SINICA
November 2013
dloi:10.3969/.issn.0253-193.2013.06.017
明红霞,梵景风,朱琳.渤海湾肠道病毒的季节分布及其污染类型分析J」海洋学报,2013,35(6):162169
Ming Hongxia Fan J ing eng, Zhu Lin. Analysis on the seasonal distribution and pollution type of enterovirus in Bohai Bay LJ.Acta
Oceanologica Sinica (in Chinese), 2013. 35(6): 162-169
渤海湾肠道病毒的季节分布及其污染类型分析
明红霞“,樊景凤,朱琳2
(1.国家海洋局国家海洋环境监测中心,辽宇大连116023;2.南开大学环境科学与工程学院,环境污染与修复基准
教育部重点实验室,天津300071)
摘要:肠道病毒是一类水传播胃肠道疾病的重要病原体。为了解感染性肠道病毒在海水环境中的季
节分布规律、污染类型以及与流行病学的关系,于2010年12月到2011年10月应用能够提供病毒感
染性信息的细胞培养结合实时定量PCR(ICC-qPCR)方法,分1个季节对渤海湾天津近岸海城表层海
水中肠道病毒进行了监测。500mL海水经超漶浓缩,8h细胞培养,然后用qPCR检测得到四季海
水样品中感染性肠道病毒的浓度为(0.2~196PFU/L.,平均值为60PFU/T.,其中夏季和秋季肠道病毒
浓度較高,其平均值分别为82PFU/T.和110PFU。秋季阳性检出率最高(85.7%),其次是冬季
(71.4%6)。经测序分析,其主要污染类型是脊髓灰质炎「型疫苗株,此外,还检测出危及公众健康的
株类口服脊灰工型疫苗脊灰和一株脊灰疫苗衍生株。由此可见,肠道病毒的季节分布和主要污染
类型与临床上的流行趋勢基本一致,海洋作为ー个天然的受纳水体为病毒提供了良好的栖息场所和
传播机会,对公众健康存在着潜在的威胁。因此,为减少相关疾病的暴发,应重点加强肠道病毒流行
季节的海洋水质监测。
关键词:感染性肠道病毒;细胞培养结合实时定量PCR;渤海湾;表层海水
中图分类号:Q93-3
文献标志码:A
文章编号:0253-4193(2013)06-0162-08
盟水质标准将肠道病毒列为指示水体中病毒污染的
指标?。在前期工作中,我们应用PCR技术对全国
肠道病毒( enteroviruses)是一类胃肠道疾病的主海水浴场中主要胃肠道病毒( enteric viruses)进行调
要病原体,广泛存在于污水、海洋、河流、湖泊等水环查时发现,肠道病毒与其他几种胃肠道病毒的污染相
境中3。流行病学研究表明:因游泳、沖浪或其他关性良好,验证了在我国水质病毒监测中将肠道病毒
娱乐活动与粪便污染的水体接触,从而感染胃肠道疾作为指示病毒的可行性。
病的病因中大部分与肠道病毒感染有关,而非肠道细
道病毒传统的检测方法是细胞培养,然而该方
菌。有报道称,人类肠道病毒的感染儿率与其通过法不适合杂质比较多,而病毒含量又很低的海水样品
娱乐活动接触受污染水的次数密切相关”,因此,检测。对丁水环境中肠道病毒的检测,目前应用最
收稿日期;2012-12-10:修订日期:2013-05-17。
基金项目:天津市自然科学基金(10. CZDIC24600):海洋公流性行业专项(201105007):国家海洋局近岸海域生态环境重点实验室开放研究基金
(201201)
作者简介:明红霞(19831ー),女,山东省德州市人,助理研究员,博!研究生,主要从事环境病原微生物的研究。E-mail: mingtian9163.co1
通信作者:朱琳(1957),山东省济南市人,教授,主要从事环境生物技术研究。E-mail: zhulin a nankai,ecdu.cn
6期明红霞等:渤海湾肠道病毒的季节分布及其污染类型分析
163
多的是RT-PCR( Reverse transcription polymerase道病毒严重污染,然而其感染性情况无从得知,并且
chain reaction)或RT-qPCR( Rteverse transcription旸道病毒在水环境中的季节变化如何、其主要污染类
quantitative polymerase chain reaction)方法。这两种型是什么尚未见报道,而这些信息恰恰与人类健康息
方法通过检測病毒中的某段特异性基因,从而达到对息相关。因此,本文选用0 C-QPCR技术就这两方面
病毒进行定性和定量的目的。但是基于上述原理,的问题开展了相关研究。
PCR相关技术的阳性检测结果可能是有感染性的或失
去活性的病毒,也可能是某段裸露的病毒基因。因此
2材料和方法
该方法在某种程度上会造成风险的高估。细胞培养2.1样本采集
结合实时定量PCR技术( (ICC-CPCR)在上述两种方法
为分析肠道病毒在渤海湾天津海域的污染状况
的基础上,利用qCR方法快速定量病毒在宿主细胞内分別于2010年12月、2011年3月、7月和10月分冬
产生的mRNA,从而达到检测具有感染性病毒的目的,季、春季、夏季和秋季1个季节采集近岸表层海水
此外,该方法通过细胞培养缓冲了水环境中的抑制剂整个渤海湾天津海域共布设7个站位,涵盖大港、塘
对PCR的影响提高了检测的灵敏度。目前,已在河沽和汉沽(DC1-HG7)大约90km的海岸线,采样站
水和海洋表层水的轮状病毒检测中得到了应用。位如?1所示。采样站位选取受人类活动影响较大
天津渤海湾是国家级水产种质资源重点保护区,的代表性海域,具体信息如表1所示。每个站位采集
随着开发、开放,体闲度假将是貝发展的重要组成。表面以下30cm处500mL海水,装于灭菌塑料桶中
张明露等人应用qCR技术确定该海域受到了肠同时测定海水的溶解氧、pH和水温
117°42
118°12'E
39°16
汉沽区
HGE HGT
塘区
BT4
entertainment center
海湾
年pan
独流减河
大港区6S冷
渤海湾
ast China S-a
河北省
图1渤海湾天津海域冧样站位
表1采样站位具体信息
编号
名称
功能区类型
纬度(N)
经度(E)
位置
DGI
独流减河入海口
其他功能用海区
38°45'27.3"
11729'23
大港
DG2
青静黄排水渠人海口
海洋特別保扩风
38°3915.0)"
117031'57.3”
大港
DG]
大港东一排淓站入海口
养殖区
38°1'28,08"
11731'5.52
大港
北塘入海口
港口区
9°06'37.4
北塘
" C5
泰达市政排污口l
港口区
3905'10.5
117°13'411,9
塘沽
FG6
中心渔港
港口区
39°10'59
1175030.2