SYT 0532-93 油田注入水细菌分析方法 绝迹稀释法.pdf

Y
中华人民共和国石油天然气行业标准
SY/T0532--93
油田注入水细菌分析方法
绝迹稀释法
1994-01-06发布
1994-06-01实施
中国石油天然气总公司发布
中华人民共和国石油天然气行业标准
SV/T0532-93
油田注入水细菌分析方法
绝迹稀释法
1主题内容与适用范围
本标准规定了汕田注入水中细菌分析的术谐、方法原理、试剂和材料、仪器和设銜、操作步骤
细閑计数方法、精密度和分析结果。
本标准适用于油田注入水中衡生菌、硫酸盐还原菌、快细澍的分析。油田其他水中细菌分析可参
照执行
2引用标准
Sy5329碎屑岩油藏注水水质推荐指标及分析方法。
3术语
干热灭菌:将待灭苗的物品放入烘箱中,逐渐升温至140~160℃,维持2~3h,达到灭菌目的
湿热灭茵:将培养和其他不宜千热灭的物品放入高压灭菌锅内,加热,使锅内蒸汽压力达
0.1MPa,持续20~30min,达到灭菌目的。
方法原理
腐生菌、硫酸还原茵和鉄细菌的湖定均采用绝迹磻释法。即将待测定的水样逐级注入到测測试庇
或试管中进行接种稀释,直到最后?个滅试瓶或试管中鯊生:长为:,然后根据细菌生长情况和稀释
数,计算出水样中细的数口。
试剂和材料
a.化学试剂(均为分析纯):乳酸钠、硫酸钠、氯化钙,硫酸铁铵、僯酸钾、武氧化钠、
化钠、氯化铵、硫酸镁、硫酸铵、硝酸钠、檬酸铁铵、磷酸氢二钾。
b.酒精溶液:浓度为75%。
c.生物试剂:牛肉管、蛋白胨、母、葡糖;
d.材料:纱布、脱脂棉、牛皮纸、线绳、00号胶塞、6号针头。
6似器和设备
a.电热恒温培养箱:使用温度30~60C:±LC:
电热鼓风千燥箱:使用温度30~300C±5C;
c.高压灭菌锅;
d.托盘天驴:最大称量100g,感量0.1g
冰
f.酸度计:刻度为0.1pHI单位
g.电炉:1000~2000W;
h.烧杯:100,500,1000ml
中国石油天然气总公司1994-01-06批准
1994-06-01实施
SY/T0532-93
.三角瓶:500,1000my
j.量筒:250,500m1
k.试管:150mm×15mm若干个;
.移液管:1m1;
m.酒精灯;
注射器:1rly
0,细口瓶:125m
p.豌酸盐还原箔测试瓶、腐生菌測试瓶、铁细菌测试瓶
采样
7.1采集的水样应具有代表性,防止细菌污染。
7.2将细口瓶刷洗干浄后用牛皮纸将瓶口包好。进行干热或混热灭菌。
7.る取样前将取样阀打开使水以5~61/min的流速畅流3min后,用已灭菌的细口瓶取样至瓶1,加
7.4从取样到检測样品的时间,不得超过241。
7.5采样后随即贴上标,注明取样日期、时间、地点、取样条件及取样人。
分折步骤
8.1测试瓶法
8.1.1根据水样中腐生菌、硫酸还原脯、鉄细菌的多少,将数个装有相应菌类培葬基的测试瓶排
成一组并依次编上序号。
8.1.2用75%的酒精渀液将测试瓶盖及操作者的手进行消毒。
8.1.3用无菌注射器吸取1m1水样注入到1号瓶内,摇匀。
8.1.4另取一支无菌注射器,从1号瓶中吸取1m1液体注入到2号瓶中,摇匀。
8.1.5重复上述操作程序,根据含菌量多少稀释到最后所需浓度。放入30~37℃恒温箱中培养。腐
生培养5~7dl,测试瓶中液体由红色变为黄色或泥浊,即表示有腐生菌生长。硫酸盐还原菌培养
14~21d,测试瓶中漖体変为黑色,即表示有硫較盐还原菌生长。铁细茵培养7~14d,测试瓶中液体
生混沚或红粽色胶状物,即表示有鉄细菌生长。
8.2液体试管法
8.2.1无菌水及生理水的配
8.2.1.1死水:取经干热或混热灭菌的试俘(或三角瓶)若千个,各加入蒸懈永9m1,塞!棉態
用牛皮纸包好,进行湿热灭菌。
8.2.1.2生批水:称取0.85g氯化钠,溶解:100r1蒸馏水中,取著千个试管或三角瓶,各加入生
理水9n1,进行湿热灭。
8.2.2无菌操作技术及接种方法
将灭菌的培养试管以及稀释水样開的无菌水或元菌生理水放入无菌室,打开紫外灯,灭菌
30mino
关闭紫外灯,带进水样,用75%沔精棉球擦手,点燃酒精灯,左手拿菌种试管,将棉塞用右手お
转松动,以利于接种时拔开,右手拿移液管,在近火焰处将移波管仲入试管内,送入水样后,立即塞
上棉塞。
8.2.る水样的磻释
8.2.3.1用无菌的移液管吸取1m1水样,放到1号无関水或生理盐水管中,摇匀,得到稀释度为10~1的
水样
SY/T0532~-93
8.2.3.2另取一文无菌的移波管从1号管中吸取1m1水样放到2号管中,得到稀释度为10-2的水样,依
次类推直到稀释到所需浓度为止。
8.2.4培养基的配制
8.2.4.1腐生菌培养禁
牛肉膏
3. Og
蛋白胨
5.0
氯化钠(NaC1)
将上述试剂放入烧杯中,加入1000m1蒸馏水,溶解后用10%氢氧化钠済波调整っH值至7.4~7.6,
分装于试管中,每管5m1,塞上棉塞,用牛皮纸包好,进行湿热灭菌,待用。
8.2.4.2硫酸盐还原菌培养基
酸氢二钾
(K2HPO:
氯化铵(NII4C1)
1.0g
硫酸镁
( Mgso4?7H
硫酸钠(Na2SO2)
0.5g
氯化钙
(Ca Cl2)
脖母弯
1.0
乳酸钠
4m1
将上:述试剂放入烧杯中,加入100m1蒸馏水,溶解后用10%氢氧化钠溶液调整pH值至7.4~7.6,
倒入三角瓶中,塞上棉塞,用牛皮纸包好,进行湿热灭菌,待用。
8.2.4.3轶细菌培养基
硫酸镁(MgSO4?7H2O)
硫酸
〔(NHa)2SO4)
磷胶二氢钾(KH2PO2)
化钙(CaC12)
硝酸钠(NaNO3)
宇檬酸铁
将上述试剂放入烧杯中。加入1000m1蒸馏水,用10%氢氧化钠溶液调pH位1.6.6~6.8,分装于试
管中,每管5m1,塞上棉塞,用牛皮纸包好,进行派热灭菌,待用
8.2.5腐生菌的测定
将装有腐生菌培养某的试管放入试管架!,取不同稀释度的水样1m,分别接入试管中,其中有
儿个试管不接入水样,做为空白对照。
接种后,放入30~37C培养箱中,培养5~7d,波体星现混汕或出現白色絮状物或液面1:有一·层
薄膜,即表示イ腐生:菌生长。如空白样有菌生:长,应重做。
8.2.6硫酸盐还原菌的测定
将胶塞用酒精棓擦跣放入瓷趾中,在紫外灯下灭30min。
称取硫胶亚铁铵粉术1.2g推放在离紫外灯30cm处,灭菌30min。倒入已灭菌的硫酸还原菌培养
将灭菌的空试管放入试管架上,分别加入不稀释度的水样1m1。速将加硫酸铵的硫酸盐
还原菌培养基蒗满每个试管,随即塞上胶塞。其中有儿个试管不接入水样作为空自样。
接种后,放入30~37℃恒温箱培养14~21d,凡生成黑色沉淀并伴有醗化钣味体,即表示有硫
酸盐还原菌生长。如果空白样有菌生长,应重做。
8.2.7钢细菌的测定